肝癌相关miR-193b的表达调控及抑癌作用研究

肝癌的发生发展是一个涉及多基因、多通路的复杂过程。近年来的研究显示一类新的小RNA分子-miRNA与肝癌等肿瘤的发生发展密切相关。运用miRNA芯片及定量PCR技术，我们发现miR-193b在76%(19/25)的肝癌标本中表达下调。初步功能分析显示miR-193b对肝癌细胞的周期、凋亡及迁移均有调控作用，而靶基因预测结果也表明与细胞周期、凋亡及侵袭转移等密切相关的多个癌基因(如MYCN、ETS1、MCL1、SP1及Cyclin D1)都可能受到miR-193b的调控，这提示miR-193b在肝癌发生发展过程中能调控多个癌基因的表达，同时通过几个不同的通路发挥抑癌作用。基于上述研究基础，本课题将对这一多功能抑癌基因的表达调控机制进行深入分析，对其调控的靶基因进行全面筛选，验证它的体外及体内抑癌效果，探讨其应用于肝癌基因治疗的可能性。

通过检测在25例肝癌及其对应癌旁组织中miR-193b的表达水平，发现miR-193b在大部分肝癌组织中的表达显著下调（19/25）。而克隆形成及裸鼠成瘤实验证明miR-193b具有体外及体内抑癌能力，有可能成为肝癌治疗的靶标分子。利用实时定量PCR检测和荧光素酶报告基因实验，验证miR-193b能够通过与CCND1、MCL1及ETS1基因3’UTR作用抑制这三个癌基因在肝癌细胞系中的表达。通过一系列深入研究，发现miR-193b可通过负调控CCND1等细胞周期相关基因的表达诱导细胞周期阻滞，通过抑制MCL1的表达增加肝癌细胞对抗癌药物的敏感性，还能通过抑制ETS1的表达抑制HGF诱导的肝癌细胞侵袭转移。这表明miRNA分子可通过同时调控多个重要基因从不同途径参与肝癌的发生发展，这一现象揭示了miRNA参与基因表达调控的复杂性，也提示miR-193b分子可能是肝癌等肿瘤治疗的潜在靶点。