鞘氨醇磷酸胆碱诱导血管内皮细胞自噬的分子机制研究

血管内皮细胞（VEC）的自噬与血管疾病和肿瘤等密切相关，迄今，VEC自噬的分子机制尚未搞清。本课题组新发现鞘氨醇磷酸胆碱（SPC）能诱导VEC自噬,并抑制膜整连蛋白β4 (ITGB4)的水平，由于我们发现ITGB4也参与了肺癌A549细胞和镉诱导的VEC自噬，我们推测ITGB4可能是SPC诱导VEC自噬的靶蛋白。在本项目中，拟利用siRNA和基因过表达技术，首先证明ITGB4在SPC诱导VEC自噬中的功能；鉴于Annexa7是参与VEC自噬的新因子，且细胞信号转导中可能是ITGB4的下游因子，本项目拟检测Annexa7在SPC诱导VEC自噬中的功能；并利用免疫共沉淀结合激光扫描共聚焦显微镜技术，研究Annexa7与ITGB4的相互作用；利用功能阻断和功能增强的技术和方法，研究Annexa7与ITGB4的上下游关系。为阐明SPC诱导VEC自噬的分子机制提供证据。

血管内皮细胞（VEC）的自噬与血管类疾病的发生密切相关，迄今，VEC自噬的分子机制尚未搞清。本课题组新发现鞘氨醇磷酸胆碱（SPC）能诱导VEC自噬，并抑制膜整连蛋白β4 (ITGB4)的水平，而Annexa7是参与VEC自噬的新因子，且细胞信号转导中可能与ITGB4具有相互作用，我们由此假设SPC通过ITGB4及Annexa7的关联，诱导血管内皮细胞自噬。在本项目中，利用siRNA和基因过表达技术，首先证明ITGB4在SPC诱导VEC自噬中具有重要作用；为了进一步确定ITGB4在SPC通路中的关键作用，我们对ITGB4在高浓度的SPC靶向血管内皮细胞引起血管痉挛的作用进行了研究，发现ITGB4是SPC发挥作用的关键因子。由于SPC没有影响Annexa7的表达，我们利用靶向Annexa7的小分子化合物ABO，研究Annexa7在VEC自噬中的功能及与ITGB4的相互作用，免疫共沉淀结合激光扫描共聚焦显微镜结果表明Annexa7通过促进ITGB4磷酸化参与ABO诱导的血管细胞自噬，从而验证了ITGB4与Annexa7在血管内皮细胞中存在相互作用的假设；体内实验表明Annexa7通过调节PC-PLC的活性抑制了动脉硬化的发展。本项目阐述了调控血管内皮细胞自噬的相关机制，为临床治疗动脉硬化提供理论依据。