可溶性表氧化物水解酶在湍流上调血管内皮细胞组织因子表达中的作用及其机制

Leading to mutiple severe diseases, thrombogenesis jeopardizes human's health greatly. Vascular endothelium-derived tissue factor (TF) intiates blood coagulation and thus promotes thrombus formation. Disturbed flow plays a vital role in thrombogenesis through imparing endothelial functions. However, the role and underlying mechanism of the effects of disturbed flow on TF expression remain unknown. Endothelial epoxyeicosatrienoic acids(EETs), degraded and inactivated by soluble epoxide hydrolase(sEH), are found to serve cardiovascular protective functions including anti-inflammation, control of high blood pressure and improvement of insulin resistence. SEH inhibitors and EETs can suppress the inflammation and NF-κB activation, which promotes TF expression. Nevertheless, it is lack of direct evidence concerning that sEH inhibitors and EETs modulate TF expression and thrombus formation. Our preliminary results showed that disturbed flow enhanced both TF and sEH expression, and a sEH inhibitor reversed the elevation of TF. Consequently, we hypothesize that distrubed flow increases endothelial TF expression and thrombus formation by induction of sEH and reduction of EETs. In this study, we plan to investigate the mechanism underlying our preliminary findings through inhibiting sEH by chemical inhibitors, overexpressing sEH by Adenovirus-infection, and verifying the transcriptional regulation of TF by EMSA. Furthermore, the established animal model with cuff placement and sEH knock-out (EPXH2-/-) mice will be applied to validate our proposal in in-vivo studies. Through this study, we anticipate to discover a novel therapeutic target for thrombotic diseases.

血管内血栓形成可引发多种疾病，危害极大。血管内皮表达的组织因子(TF)启动凝血，促进血栓形成。湍流直接作用于血管内皮，上调TF表达，是血栓形成的重要诱因，但其机制不详。内皮合成的表氧化二十碳三烯酸（EETs）具有心血管保护功能，可溶性表氧化物水解酶（sEH）则使其降解、失活。sEH抑制剂与EETs抑制炎症及NF-κB激活，而NF-κB已被证实可诱导TF表达，但sEH与EETs对TF的调节作用及机制却无报道。本课题组预实验提示，湍流同时上调内皮中TF与sEH的表达，而sEH抑制剂则阻断了湍流对TF的上调作用。据此我们推测湍流通过增加sEH、减少EETs而诱导TF的转录与表达，进而促进血栓形成，sEH抑制剂则阻断此过程，发挥抗血栓作用。本课题组拟用抑制剂、腺病毒过表达、EMSA等手段在机制上深入探讨，并用EPXH2-/-小鼠、湍流及血栓动物模型在整体水平验证，以期为血栓性疾病的治疗提供新靶点。

血管内血栓形成可引发心脑血管病等多种疾病，危害极大。血管内皮表达的组织因子(TF)启动凝血，促进血栓形成。作为心脑血管疾病的致病因素，湍流及血浆脂类物质直接作用于血管内皮，上调TF表达，是血栓形成的重要诱因，但其机制不详。内皮合成的表氧化二十碳三烯酸（EETs）具有心血管保护功能，可溶性表氧化物水解酶（sEH）则使其降解、失活。sEH抑制剂与EETs抑制炎症及NF-κB激活，而NF-κB已被证实可诱导TF表达，但sEH与EETs对TF的调节作用及机制却无报道。本课题研究了湍流及高血脂对血管内皮中TF与sEH表达的影响及其作用机制。.本课题组分离并原代培养了人脐静脉内皮细胞，利用振荡器及流室模型模拟血管中的层流与湍流。当人脐静脉内皮细胞生长密度达到100%后，给予振荡流（0.5±4 dyn/cm2, 1Hz）或层流（12 dyn/cm2）刺激。在雄性6周龄C57BL/6小鼠一侧颈总动脉放置套管，以改变颈总动脉血流模式，造成湍流。给予小鼠高脂饮食饲养4周，以造成高血脂症。然后，利用免疫蛋白印记、实时定量聚合酶链反应、ELISA方法检测检测TF、组织因子途径抑制物（TFPI）与sEH表达、EET与DHET含量以及血脂的情况。.研究结果表明，层流下调TF表达，而湍流上调其表达。湍流还上调了sEH的表达，并降低了sEH底物——11,12-EET水平。与湍流作用相似，腺病毒过表达sEH也使TF表达增加。sEH抑制剂——AUDA以及sEH底物——EET预处理内皮细胞，均显著逆转了湍流诱导上调的TF表达。在小鼠左侧颈总动脉放置套管，以造成湍流。与对照组比较，湍流组未显著上调血管TF与sEH表达，也未显著改变血管11,12-EET、11,12-DHET水平。高脂饮食使小鼠体重及血脂升高，且上调血管TF与sEH表达。AUDA下调高脂血症小鼠TF表达。此外，降脂药物——瑞舒伐他汀上调了TFPI表达。.综上所述，湍流及高血脂症使血管内皮细胞sEH表达上调，EET降解增多，进而引起TF表达上调。sEH抑制剂可逆转TF表达上调。因此，sEH在湍流及高血脂症引起的TF表达上调过程中发挥重要作用。