Tim-1调节Th17细胞参与排斥反应的机制及其在防治慢性排斥中的作用

慢性排斥是影响移植物长期存活的关键问题，其发生机制涉及新型Th17介导的炎症反应并发挥重要的作用，但Th17致慢性排斥的机制特别是分子调控机制不清。本课题基于Th17介导慢性排斥反应的认识以及前期实验中Th17高表达Tim-1分子的新发现，拟进一步研究Tim-1调节Th17参与排斥反应的机制及其在防治慢性排斥中的作用。通过体外培养Th17，以抗体阻断或RNA干扰技术研究Tim-1阻断或缺陷对Th17活化、生物学特性和功能的影响；探讨对T17细胞RORγt等信号蛋白的作用；采用以Th1缺陷小鼠为受者进行同种心脏移植，观察Th1缺失后Th17介导排斥反应的作用以及阻断Tim-1后对排斥反应的影响；以bm12为供体的同种心脏移植慢性排斥模型，研究阻断Tim-1后同种移植物的炎症反应、血管病变机制以及存活期的变化，为进一步认识Th17参与慢性排斥及Tim-1调控Th17防治慢性排斥提供思路和实验数

慢性排斥是影响移植物长期存活的关键问题，其发生机制涉及新型Th17介导的炎症反应并发挥重要的作用，但Th17致慢性排斥的机制特别是分子调控机制不清。本课题成功建立Th17细胞体外诱导培养体系，FACS检测发现Th17细胞高表达Tim-1分子。Th17细胞培养时加入Tim1阻断抗体，其IL-17的分泌量降低。同时Western-blot检测发现与对照组相比，anti-Tim1组中RORrT 、STAT3、IRF4蛋白的表达明显降低，提示Tim1可通过RORrT 、STAT3、IRF4参与的信号途径来调控Th17的分化发育。以回输Th17细胞的Rag1-/-小鼠为受者、Balb/c为供体同种心脏移植模型，以T-bet-/- B6小鼠为受者、Balb/c为供体同种心脏移植模型，bm12为供体、Balb/c为受体的同种心脏移植慢性排斥模型，体内给予Tim-1抗体治疗，结果发现阻断Th17细胞中Tim-1信号通路可以明显的延长小鼠心脏移植物的存活时间，且病理损害亦明显减轻。在慢性排斥模型中，移植物内IL-2、IL-17、CD11b、mRNA表达水平显著较低，IL-10的水平升高，IFN-γ则变化不大。上述结果提示Tim1在Th17细胞的分化发育中发挥重要的作用。本课题的研究结果为进一步认识Th17参与慢性排斥及Tim-1调控Th17防治慢性排斥提供思路和实验数据，具有潜在的应用价值。