TGM3基因在口腔黏膜白斑恶性转化中的作用和机制研究

Oral leukoplakia (OL) is the most common premalignancy in oral disease. Assessing objectively and intervening actively the high-risk, potentially malignant OL is a significant approach to reduce the incidence of oral squamous cell carcinoma (OSCC). Based on our previous findings that TGM3 functions as a tumor suppressor in the carcinogenesis and development of OSCC, we attempt to reveal the role of TGM3 in the malignant transformation of OL. The preliminary studies suggested that downregulation of TGM3 might contribute to the malignant transformation of OL and TGM3 expression level might closely associate with the clinical outcome in patients with OL. To confirm this hypothesis above, OL cell lines will be used to analyze the biological function and molecular mechanism of TGM3 in OL malignant transformation by means of TGM3 exogenous overexpression and knock down. OL samples will be used to evaluate the feasibility of TGM3 as a novel prognostic predictor for patients with OL. This study is significant not only for revealing the molecular mechanism of malignant transformation of OL but also for exploring new approach to judge the prognosis of OL. Taken together, the project surely has important social significance and potential application value.

口腔黏膜白斑是最常见的口腔癌前病损，对具有恶性转化潜能的口腔白斑进行客观预测，积极干预是降低口腔鳞癌发病率的重要措施。本课题在前期研究证实TGM3基因是参与口腔鳞癌发生、发展过程中具有重要生物学功能的抑癌基因的研究基础上, 对其在口腔白斑恶性转化中的作用进行了初步探索，相关预实验提示：TGM3表达下调可能促进了口腔白斑的恶性转化，其表达水平的高低可能影响口腔白斑患者的预后。为验证这一假说并揭示其中的分子机制，本课题拟通过口腔白斑细胞系、口腔白斑组织样本，采用慢病毒过表达、RNA干扰和大样本回顾性分析等方法，从分子、细胞和组织多层面分析TGM3基因在口腔白斑恶性转化过程中的功能和相关机制，并探讨其作为预测口腔白斑恶性转化生物标志物的可行性。该课题的研究对于揭示口腔白斑转化为口腔鳞癌的分子机制，探索预测口腔白斑恶性转化的方法提供了新的思路。课题具有重要的社会意义和潜在的应用价值。

口腔黏膜白斑是最常见的口腔癌前病损，对具有恶性转化潜能的口腔白斑进行客观预测，积极干预是降低口腔鳞癌发病率的重要措施。本课题在前期研究证实TGM3基因是参与口腔鳞癌发生、发展过程中具有重要生物学功能的抑癌基因的研究基础上, 对其在口腔白斑恶性转化中的作用进行了初步探索，相关预实验提示：TGM3表达下调可能促进了口腔白斑的恶性转化，其表达水平的高低可能影响口腔白斑患者的预后。为验证这一假说，课题组在该项目资助下：采用半定量RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测了TGM3基因在口腔白斑细胞和组织中的表达水平；通过亚硫酸氢盐测序分析了TGM3基因在口腔白斑细胞及组织中表达下调的机制；通过腺病毒过表达外源性TGM3基因和沉默内源性TGM3基因表达分析其对口腔白斑细胞生物学行为的影响；采用蛋白免疫印迹检测分析过表达外源性TGM3基因和沉默内源性TGM3基因表达对口腔白斑细胞凋亡通路相关蛋白表达变化的影响；采用免疫组化技术检测TGM3在口腔白斑组织中的表达情况，并回顾性分析TGM3表达与口腔白斑患者临床病理和预后的相关性。结果发现：TGM3基因在部分口腔白斑细胞和组织中表达下调；TGM3基因启动子区CpG岛的异常高甲基化是导致其在部分口腔白斑细胞和组织中表达下调的分子机制；外源性表达TGM3基因能显著抑制口腔白斑细胞的增殖、克隆形成，诱导其凋亡；沉默TGM3基因表达能显著促进口腔白斑细胞的增殖、克隆形成并抑制其凋亡；Log rank生存分析证实TGM3低表达的口腔白斑患者癌变率显著高于TGM3高表达的患者；多因素Cox回归分析证实TGM3表达水平可以作为预测口腔白斑恶性转化的独立预测因子。该项目的研究一方面为揭示口腔黏膜白斑转化为口腔鳞癌的分子机制提供新的实验依据；另一方面对具有高度恶性转化潜能的口腔黏膜白斑进行客观预测从而采取积极有效的治疗措施提供新的诊断和治疗靶点。项目具有较好的创新性和潜在的应用价值