咪唑盐MNIB对肿瘤细胞蛋白合成的作用及相关机制研究

延伸因子EF2是决定蛋白合成的延长阶段的关键分子，参与调控细胞周期的进展， EF2信号转导通路对于肿瘤细胞的生长和增殖不可或缺。前期研究表明咪唑盐类化合物MNIB具有显著的体内外抑制肿瘤增殖活性，发现MNIB可明显降低磷酸化EF2蛋白水平，阻滞肿瘤细胞于G1期，引起肿瘤细胞凋亡。本项目拟在前期工作的基础上，应用放射分析、酶反应动力学、荧光显微动态观察、免疫印迹等细胞及分子生物学实验技术，研究MNIB对细胞蛋白合成的影响，对细胞内信号转导通路的调控机制，探索其作用靶点，阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机理，为研究疗效好、副作用小的新型咪唑盐类抗肿瘤先导化合物提供实验基础。

1. 本课题按实验方案建立了蛋白合成速率检测、细胞内ATP及活性氧自由基的检测方法，优化了实验条件。选择不同浓度的受试化合物MNIB作用在不同时间段，检测了细胞凋亡程度及细胞周期的变化。与蛋白合成直接相关的核糖体非常关键，游离核糖体位于位于细胞质基质中，主要合成胞内蛋白；附着核糖体主要附着在内质网和线粒体上，负责合成外运蛋白。本课题进一步研究了内质网及线粒体功能，检测了线粒体膜电位，氧化损伤等变化，为研究MNIB调节细胞凋亡信号通路提供了信息。.2. 本课题按实验方案建立了细胞免疫化学、动态荧光显微观察的实验方法。选择常用化疗药物doxorubicin做细胞毒性阳性对照，检测了核内DNA嵌入导致细胞凋亡的特点，并研究与JNK信号通路的关系。该实验结果对于鉴别化合物MNIB的药理活性特点，通过分析其与阳性药的异同，有助于研究其作用机制及确定其作用靶点有重要意义。.3. 本课题执行期间，鉴于当前纳米抗肿瘤药物的快速发展，结合同时开展的其他合作项目，引入了纳米新剂型到本课题研究，初步结果显示纳米载体可以提高抗肿瘤化合物的治疗效果，纳米剂型结合咪唑盐MNIB将起到更强的抗肿瘤作用，同时减低了该化合物的毒性，开拓了本课题的后续研究方向。该部分研究内容属于必要的调整。.4. 本课题结果分别在Biomaterials(IF 8.312), Biomacromolecules (IF 5.479), Pharmazie (IF 1.003)等杂志以第一作者发表研究论文各一篇。参与研究分别在ACS Nano (IF 12.033), Soft Matter (IF 4.39), Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry (IF 3.919 ), Investigational New Drugs (IF 3.357), RSC Advances(IF 3.708)等杂志各发表一篇研究论文。参编论著一本:Update on Polymer Based Nanomedicine,由英国Smithers Rapra Publishing出版。.5. 本课题执行期间，指导了一名硕士生（张宇宁）课题，参与指导了两名博士生（周永云，王蕊）课题。建立并加强了国际合作。