四逆散有效组分的改善睡眠作用机理与体内代谢过程研究

本课题在以往初步阐明了四逆散改善睡眠作用机理与明确了其有效组分的研究成果基础上，以大鼠、小鼠与果蝇为模式生物，运用药理学与药代学等多种科学研究方法，综合利用色谱分析、微透析、电生理、电化学检测、分子生物学等多种现代先进技术，从中枢内源性物质确定和围绕现代生物学的睡眠发生机制相关假说从分子水平阐明四逆散的有效组分改善睡眠的作用机理，同时进行有效组分的体内代谢过程研究，为临床应用四逆散治疗失眠提供科学依据，为了研制具有改善睡眠作用的中药创新药物奠定基础。

目的：明确四逆散有效组分改善睡眠作用的机制及体内的代谢过程。.方法：①利用色谱技术，开展四逆散有效组分的制备方法的研究；②利用戊巴比妥钠所致小鼠睡眠实验方法，开展四逆散有效组分改善睡眠作用的量效与时效关系的研究；③利用受体研究与分子生物学技术，开展四逆散有效组分改善睡眠作用的机制研究；④利用色谱与质谱联用技术，开展给予四逆散有效组分后实验动物脑脊液中生理活性物质的结构分析与鉴定；⑤利用色谱技术，开展四逆散有效组分的体内代谢过程的研究。.结果：①按辛弗林：芍药苷：柴胡皂甙C：甘草次酸=8：1：1：5的比列，分别精确称取一定量的辛弗林（HPLC>98）、芍药苷（HPLC>98％）柴胡皂苷C（HPLC>98％）与甘草次酸（HPLC>98％），混均后用2%吐温溶解并定容到所需浓度；②在62.50～1320.00 mg/kg剂量范围内，四逆散有效组分延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间的作用呈剂量依赖性，剂量为330.00 mg/kg时开始起效至660.00 mg/kg时药效最大；按660.00 mg/kg剂量给予四逆散有效组分后的第4天开始起效；③四逆散有效组与氟马西尼、L-Arg、L-NAME、PCPA及5-HTP联合应用对戊巴比妥钠所致小鼠睡眠时间有延长作用；明显增加小鼠全脑、丘脑、脑干NO含量，但SP、PGE2含量无显著影响；增加全脑、脑干TNF-α的含量；增加丘脑IL-6含量，降低全脑、脑干PGD2含量；降低全脑IL-1β、IL-6含量，降低丘脑TNF-α含量；小鼠海马区和下丘脑部位以及前额叶皮质区TPH的含量均显著升高；小鼠前额叶皮质脑区和下丘脑部位的5-HIAA含量及5-HIAA/5-HT比值显著升高；下丘脑部位Slc6a4基因表达明显降低，而Htr1a基因表达显著升高。④对给予四逆散有效组分后实验动物脑脊液中的生理活性物质初步分析与鉴定为20个化合物。⑤阐明了四逆散有效组分单次腹腔注射的体内代谢过程。。.结论：四逆散有效组分改善睡眠的作用呈剂量依赖性，剂量为330.00 mg/kg时开始起效至660.00 mg/kg时药效最大；按660.00 mg/kg剂量给予四逆散有效组分后的第4天开始起效；其改善睡眠的作用机制是通过多途径来实现；初步分析与鉴定了给予四逆散有效组分后实验动物脑脊液中20个生理活性物质；确定了四逆散有效组分的体内药代动力学的参数。