人血清中RSV Pre-F蛋白抗原位点Ø特异性中和抗体水平及作用研究

Respiratory syncytial virus (RSV) is the most important pathogen of acute lower respiratory tract infections in infants and young children worldwide. Unfortunately, over 50 years of vaccine development no vaccine has yet been licensed. RSV-neutralizing antibodies appear to correlate well with protection from RSV disease. The recent study reported that the major target of RSV-neutralizing antibodies elicited by natural infection was found to reside primarily on the prefusion conformation of RSV F (Pre-F). On the other hand, antibodies such as 5C4, AM22, and D25 are substantially more potent than palivizumab and target antigenic site Ø (zero). And the substantially higher neutralization potency observed for Pre-F -specific antibodies that target antigenic site Ø. The present study plans to collect sera of infants hospitalized in our Respiratory Medicine Department and absorb with postfusion F. The unretained sera was used to measure the titer of antigenic site Ø specific neutralizing antibodies and reactivity by neutralization assay and ELISA.The association between the level of antigenic site Ø specific neutralizing antibodies and severity of RSV disease will be investigated. The mutation of antigenic site Ø will also observe. This study will provide information for RSV vaccine development.

呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）是引起婴幼儿急性下呼吸道感染最常见和最重要的病毒病原。虽然经过50多年不断研发，迄今仍没有运用于临床的RSV疫苗。最新的研究发现人血清和兔血清中RSV特异性中和抗体主要是针对Pre-F，而高中和能力的单克隆抗体5C4，AM22和D25的结合位点是Pre-F上的抗原位点Ø，并且抗原位点Ø在诱发保护性免疫中有着重要的作用。本研究拟收集本院呼吸中心住院患儿血清，采用亲和层析法吸附Post-F特异性中和抗体后，运用中和试验和ELISA等方法探讨人血清中RSV特异性中和抗体主要针对Pre-F上的抗原位点Ø，抗原位点Ø特异性抗体水平与RSV病情相关性；并且监测是否存在影响单抗5C4中和活性的抗原位点Ø突变，以期为以抗原位点Ø为主进行RSV疫苗研究提供理论依据。

呼吸道合胞病毒（RSV）是引起5岁以下婴幼儿急性下呼吸道感染（ALRI）最常见、最重要的病毒病原，但迄今为止尚没有特异性的疫苗和药物对RSV进行防治，仅有帕丽珠单抗对高危患儿进行预防。RSV F和G蛋白是RSV 疫苗和治疗性抗体研发最重要的靶点。本研究首先分析了RSV急性下呼吸感染门诊和住院患儿的临床特特征，然后检测了从婴幼儿到成人的血清中RSV中和抗体和帕丽珠样中和抗体（PLNA）的水平，了解其变化规律，再进一步分析RSV流行株中Pre-F重要的抗原位点III、Ø以及G基因的变异情况。研究发现：1. RSV感染ALRI患儿易出现发热、喘息和呼吸困难，小年龄和早产是RSV相关ALRI患儿住院的危险因素，早产还是RSV感染毛细支气管炎患儿后短期内反复喘息发作的危险因素；2. RSV中和抗体对RSV感染具有保护作用，但在2岁前处于较低水平，2-5岁达到最高峰后逐步下降，在60-70岁时降至最低，甚至低于2岁前儿童，然后在70岁后又开始回升，而血清中PLNA水平在出生后7-12月较出生后1-6月下降，随后开始升高，在2岁后即可接近PLNA的保护水平（40μg/ml），并没有出现中和抗体类似的明显下降过程；3. Pre-F抗原位点III相较于抗原位点Ø更保守，其变异率仅为0.2%，但在RSV流行株中存在改变抗原位点Ø 特异性抗体5C4中和活性的K201N改变；4. RSV A、B亚型G基因都处于不断进化过程中，而这种进化可能会促使病毒在宿主体内更易生长、复制，从而导致到重症疾病的发生。以上研究结果RSV是婴幼儿急性下呼吸道感染中的重要病原，需进行儿童RSV感染所致疾病的预防、早期诊断和治疗，而RSV中和抗体和PLNA在婴幼儿具有保护作用，但RSV在进化过程中，所以在RSV疫苗和抗体的研发过程中，应考虑病毒进化的影响，尽可能的覆盖临床流行株的变异。本课题相关结果撰写论文3篇，培养硕士研究生2名，项目负责人在此基础上获得英国牛顿国际奖学金。