Naked2蛋白在肠癌中调控Wnt和EGFR信号通路机制研究

Wnt和EGFR信号通路与组织发育密切相关，其紊乱会导致癌变，我们发现Naked2同时参与调控这两条通路。本研究拟改变肠癌细胞中Naked2的表达量，检测Dishevelled(Wnt通路蛋白)和TGFa（EGFR通路蛋白）表达变化，明确Naked2对Wnt和EGFR的调控机制，并采用脉冲追踪和激光共聚焦显微镜方法分别测定Naked2与TGFa、Dishevelled结合的时间和空间上的差异和联系，阐明Naked2在维持细胞动态平衡中的作用；动物实验拟检测Naked2对裸鼠成瘤及肿瘤转移的影响；临床实验拟采集100例肠癌样本，比较Naked2在不同阶段肠癌组织中的表达，测定Wnt和EGFR通路的活力，并提取术后未复发及半年内复发的切片样本比较Naked2的表达，探索Naked2与肠癌恶变及预后的关系。本项研究将对阐明Naked2拮抗肿瘤的机制和开发Naked相关抗肿瘤药提供重要指导作用。

项目重点研究了一个能够同时调节EGFR和Wnt两条信号通路的特殊蛋白分子Naked2在肠癌发生发展中的作用机制。我们首先以正常肠上皮细胞NCM460为对照，对几株肿瘤细胞SW480, Caco2, HCT-116的Wnt信号通路活力进行了测定，发现几株肿瘤细胞中Wnt的活力均有显著升高，而Naked2活力显著下降。当Naked2表达升高时，Wnt信号通路的活力受到明显抑制；相反，当Naked2表达被抑制后，Wnt活力增强。在几株肠癌细胞中EGFR通路均被激活，而当过表达Naked2后EGFR通路活力被明显抑制。进一步的机制研究发现Naked2能够与Wnt信号通路重要分子Dishevelled-1在极化细胞的侧边膜结合并诱导该分子降解，从而抑制Wnt信号通路，而对于Dishevelled的另外两个同源体Dishevelled-2和3则没有明显的降解作用。35S脉冲追踪实验进一步证实Naked2在生成初期，首先和TGFα结合并伴随其到细胞膜，之后再与Dishevelled-1结合诱导TGFα降解。这样的结果证明Naked2可以有效的调控Wnt信号通路和EGFR信号通路。接下来，我们研究Naked2对肠癌细胞增殖分化的影响，发现Naked2能够有效抑制Caco-2细胞和HCA-7细胞株的增殖，也显著抑制了3D培养状态下的RKO肠癌细胞株的增殖。Naked2的生物学效应进一步用动物实验进行验证。裸鼠成瘤实验表明Naked2可以有效的抑制小鼠肿瘤的生长，肿瘤转移实验也表明Naked2可以有效抑制肝转移。最后，我们在临床标本中对Naked2的功能进行了进一步验证。利用自主研发的Naked2检测ELISA技术，对收集的100多例肠癌样本进行分析，发现Naked2表达水平均有显著下降。进一步对其中四例进行了Western blot和免疫组化分析，发现了Naked2均有明显的表达下降。通过这一系列的细胞、动物和临床的实验，证实了Naked2是调控肠道细胞动态平衡的重要分子，Naked2的缺失或表达抑制会促进肠癌的发生发展。基于Naked2为靶点的研究将对于肠癌的预防及治疗具有潜在的重要意义。. 项目已经按照计划全部完成并且做了进一步的深入。发表基金标注资助SCI论文5篇，总影响因子21分，申请人均为通讯作者。培养研究生7名。