猪甲状腺miRNA对生长及肉质性状调控机制的研究

本研究采用miRNA扩增结合miRNA芯片技术研究猪甲状腺中miRNA的表达谱；从miRNA的表达谱中筛选变化最为明显的miRNA，定量分析验证基因芯片的结果；并利用生物信息学获得相应miRNA的靶基因，分析这些靶基因不同基因型对生长性状及肉质性状的遗传效应。以期阐明miRNA在动物机体生长发育中的调控机制，挖掘出对猪肉产量、品质的基因工程育种的新靶基因，为生长及产肉性状的分子改良提供新的思路和有益的线索。

本研究采用miRNA测序结合miRNA芯片技术研究不同生长发育时期猪甲状腺中miRNA的表达谱；从miRNA的表达谱中筛选变化最为明显的miRNA，定量分析验证基因芯片的结果；并利用生物信息学获得相应miRNA的靶基因，分析这些靶基因对生长性状及肉质性状的遗传效应。.通过与miRBase 16.0数据库进行比对，本研究首次鉴定了猪甲状腺发育过程中表达的miRNA 804种，包含miRBase数据库中已公布的猪miRNA 284种。通过miRNA芯片技术检测了猪甲状腺10个不同生长阶段miRNA的表达，结果得到了248个差异显著的miRNA（p<0.01）。进一步分析得到差异变化最为显著的20个miRNA分别为miR-181a，miR-451，miR-199a，miR-214，miR-130a，miR-1285，miR-21，miR-191，miR-92a，miR-23a，miR-let-7e，miR-let-7c，miR-24，miR-27a，miR-148a，miR-128，miR-23b，miR-99a，miR-99b，miR-106a。利用Q-PCR技术选取了7个差异表达的miRNAs（miR-191，miR-181a，miR-92a，miR-21，miR-451，miR-128和miR-106a）在猪不同生长阶段甲状腺组织中进行了验证，进一步确定了Solexa测序用于鉴定miRNA的真实性与可靠性。这一结果暗示，这些miRNA在猪甲状腺发育的生物学过程中可能扮演着极其重要的调控角色。通过Targetscan对差异miRNA靶基因的预测，并结合下丘脑-垂体-甲状腺轴上与甲状腺功能相关的重要功能基因，筛选得到重要的功能基因为TRH、CGA、TPO以及TRHR。并对这些重要的功能基因进行了遗传效应的分析，结果表明这些基因与猪的生长、胴体以及肉质性状存在显著关联。.目前，猪甲状腺miRNA对肉质及生长性状基因表达调控的研究十分欠缺。miRNA介导的调控方式是基因表达调控机制中不可缺少的重要组成部分，促进了遗传信息表达调控的深入探讨。猪生长发育过程中甲状腺组织miRNA的鉴定为进一步研究猪生长及肉质性状的分子调控机制提供了新的参考依据，对于miRNA在动物机体生长发育中的调控机制，挖掘出提高猪肉产量、品质的新靶基因，为生长及产肉性状的分子改良提供新的思路和有益的线索。