抗氧化蛋白Prx1对氧化应激诱导的口腔白斑细胞凋亡的影响

白斑是口腔最常见的癌前病变，目前对白斑发病机理不甚清楚，因此探究其发病机理，寻找有效治疗靶点是目前研究关注焦点。氧化应激与白斑的发生密切相关。Prx1是新发现的抗氧化蛋白，在氧化应激中扮演重要的角色。我们前期研究发现Prx1在口腔白斑、口腔鳞癌表达增高，Prx1与氧化应激诱导的口腔鳞癌密切相关。本研究拟采用免疫共沉淀、免疫印迹、GST pull-down等方法，检测口腔白斑组织中细胞凋亡、Prx1及凋亡相关蛋白表达；研究氧化应激对口腔癌前病变DOK细胞中Prx1与ASK1表达及相互作用，以及细胞凋亡的影响；通过Prx1沉默及敲除研究Prx1对氧化应激诱导细胞凋亡在口腔癌前病变中作用。旨在探讨Prx1与氧化应激诱导的口腔白斑相关性及Prx1/ASK1信号转导通路调控的细胞凋亡在白斑中的作用，阐述Prx1过表达在口腔白斑中作用的分子机理，为口腔白斑治疗提供新靶点和科学依据。

本研究从口腔白斑组织、口腔癌前病变DOK细胞及动物实验三个方面，研究抗氧化蛋白Prx1在口腔白斑发生中的作用及作用分子机制。结果表明：.在人口腔粘膜白斑组织中，免疫组化检测8OHdG、 Prx1、ASK1和P-ASK1 、p38和p-p38染色的MOD值均高于正常组，且差异有统计学意义（P＜0.05）；TUNEL法检测口腔白斑凋亡指数明显高于正常组织（P＜0.05）。Q-PCR和Western Blot检测：与正常口腔黏膜相比，口腔白斑组织中Prx1、ASK1、p38mRNA、蛋白表达水平升高（p＜0.05）。在人癌前病变DOK细胞株中，250uM/L、500uM/L、1mM/L H2O2分别处理DOK细胞20min，DOK细胞凋亡程度逐渐增加(p＜0.05)。qRT-PCR和Western Blot检测：与对照相比，随着H2O2浓度的升高，Prx1及 ASK1mRNA、蛋白表达均增高；p-p38蛋白表达逐渐减少。Co-IP、质粒共转染+Co-IP及GST pull-down 检测结果表明DOK细胞中未见明显Prx1与ASK1结合。Prx1功能丧失细胞实验：Prx1敲除DOK细胞中，随着H2O2浓度的增高，细胞凋亡水平增加；ASK1 mRNA、p-ASK1蛋白表达增高，p-p38表达逐渐下降； p38表达变化不明显。动物实验：采用Prx1基因捕获技术构建Prx1敲除小鼠的模型。Prx1基因敲除和野生型小鼠各70只。采用0.001%4NQO饮水法诱发制备舌癌前病变模型。结果发现与野生组小鼠相比，舌癌前病变中Prx1蛋白、ASK1mRNA、p38表达明显增高（p＜0.05）。Prx1敲除后，Prx1敲除各组舌粘膜上皮的凋亡指数增加，其中敲除对照组及4NQO组差异有统计学意义（p＜0.05）。舌癌前病变的p-ASK1、p-p38表达明显降低（p＜0.05）。.小结：首次发现Prx1在氧化应激的口腔白斑中表达增高，Prx1过表达与细胞凋亡密切相关。研究提示Prx1可能具有抗凋亡作用，通过调控下游基因ASK1、p38，在MAPK信号通路中发挥重要作用。研究结果为口腔白斑防治提供理论依据及新的靶点。