小鼠第一极体重构卵母细胞的机制研究

第一极体是卵母细胞第一次减数分裂的小细胞，含有和次级卵母细胞相同的基因型，但第一极体不参与受精过程，在排出后十几小时便自行退化，故第一极体在退化前的生殖潜能一直被忽视。当卵母细胞数量少，增加雌性染色体来源变得尤为重要。本项目在前期工作基础上，构建第一极体作为雌性染色体来源的重构胚胎，检测其生长发育、基因有序表达及表观遗传重编程与正常胚胎的异同。首先分析第一极体与卵母细胞基因组DNA的差异，构建第一极体染色体为雌性染色体来源的重构胚胎，再以体外受精胚胎为对照，应用基因芯片等技术筛选第一极体重构胚胎表达差异显著的功能结构基因，用RT-PCR、Western blot和免疫荧光术检测这些基因从受精卵到囊胚的表达变化，用微量细胞甲基化特异PCR分析这些基因DNA甲基化和结合组蛋白的修饰变化。从细胞和分子水平，探索第一极体确实所具有的生殖潜能。

本项目构建小鼠第一极体作为雌性染色体来源的重构胚胎，检测其表观遗传重编程与正常体外受精胚胎的差异，探索第一极体的发育潜能。首先我们分析了第一极体与卵母细胞基因组DNA的差异，发现第一极体生长发育相关的印记基因H19及Igf2表达与卵母细胞存在差异。然后，构建第一极体染色体为雌性染色体来源的重构胚胎，以正常体外受精胚胎为对照，应用偏重亚硫酸盐方法检测了上述两个印记基因的甲基化修饰动态变化，发现H19及Igf2在第一极体重构胚胎中均有异常的甲基化变化。揭示第一极体重构胚胎有一定的发育潜力，但是仍需更多的基因表达检测及其移植实验进一步探索其发育潜能。