基于胃肠道生物转化的酸枣仁皂苷A降解产物镇静催眠作用机制研究

根据我们在酸枣仁皂苷成分提取纯化技术及其镇静催眠作用等方面的前期研究，本项目利用HPLC/MS/MS检测技术，研究酸枣仁皂苷A在Sprague-Dawley(SD)大鼠胃肠道系统中的生物转化过程和途径，结合化学结构变化特征，揭示该转化作用的代谢动力学意义，并探讨胃肠道pH、酶、微生物等环境因素的影响作用。利用免疫组化、免疫荧光、荧光探针以及RT-PCR技术，比较不同转化产物对人工培养SD大鼠海马神经细胞GABA-A受体激活作用以及受体基因表达的调控，从分子机制角度阐明传统药（食）物-酸枣仁主要活性成分的镇静催眠作用机理，揭示胃肠道系统在酸枣仁皂苷A类成分化学结构修饰方面的生理学意义，以此明确胃肠道独特的生物转化作用，丰富胃肠道生物转化研究的基础理论，进而筛选新型高效、安全的镇静催眠活性成分，为开发新型镇静催眠保健食品、维护大众健康提供理论基础和科学依据。

本项目利用HPLC/MS/MS检测技术，通过体外试验，研究了SD大鼠胃肠道对酸枣仁皂苷A的降解作用，揭示胃肠道pH、酶、微生物为该过程中的重要影响因素。酸枣仁皂苷A在胃肠道中主要代谢为其一系列的水解产物，其代表性产物为酸枣仁皂苷B和酸枣仁皂苷元。在此基础上，采用SYBR Green I荧光定量技术，以人工培养大鼠海马神经细胞GABA(A)α1、GABA(A)α5受体基因mRNA含量为指标，研究酸枣仁皂苷A降解产物对人工培养大鼠海马神经细胞GABA-A受体基因表达的影响。利用MQAE荧光探针技术，比较酸枣仁皂苷A及其降解产物（酸枣仁皂苷B和酸枣仁皂苷元）作用后海马神经细胞内氯离子浓度的变化，以此评价降解产物对GABA-A受体的激活作用。结果表明，酸枣仁皂苷A及其降解产物在人工培养大鼠海马神经细胞GABA-A受体基因表达及受体激活方面均表现出一定的生物活性，但在作用强度上表现一定的差异，揭示胃肠道对于酸枣仁皂苷A降解过程对于促进该成分的转化、吸收、分布，进而发挥其镇静、催眠作用具有独特的的生物学意义。