血型A糖抗原模拟多肽的研究

血型ABO不相容移植是当前器官移植研究领域的热点，其一关键难点是如何抑制由血型A抗原－抗体介导的超急性排斥反应。新近，血型A糖抗原被用于免疫吸附滤除血型A抗体，在抑制由A抗体引起的超急性排斥反应中显示出重要作用。但A糖抗原存在价格昂贵等诸多缺点，已成为阻碍ABO不相容器官移植研究和应用的一个瓶颈。因此，研制一种A糖抗原的模拟替代物成为当务之急。本项目在前期发现肽EYWYCGMNRTGC具有A糖抗原模拟作用的基础上，利用定点突变技术、二级噬菌体文库构建、筛选技术进一步研究明确与血型A抗体有更高亲和力的A糖抗原模拟多肽；制备可溶性多肽；初步构建基于多肽的新型血型A抗体滤除材料和易于标准化的ELISA检测方法。本项目的实施有望获得与血型A抗体有高亲和力的A糖抗原模拟多肽；用此新颖的多肽代替A糖抗原，为克服A糖抗原的不足，推动ABO不相容器官移植的理论和应用研究提供新思路。

人工合成的血型A糖抗原被用于亲和滤除血浆中的抗A，在抑制供体表达的A抗原与受者体内的抗A介导的超急性移植排斥反应方面发挥了显著的作用。由于糖抗原的合成十分困难、价格昂贵，研究A糖抗原的替代物就十分必要。本课题通过丙氨酸扫描前期获得的血型A抗原模拟肽EYWYCGMNRTGC确定其中的关键氨基酸，以此氨基酸为基础构建二级噬菌体文库，进一步筛选血型A抗原的模拟肽，分析模拟肽与抗A的亲和力及可能的相互作用方式。构建基于二次筛选肽的抗A ELISA检测方法和滤除方案。结果发现肽EYWYCGMNRTGC中的E1/W3/T10/C12是模拟A抗原的关键氨基酸，基于此4个氨基酸的二级文库筛选到新的A抗原模拟肽EYWYCLSWRTGC；ELWTNGSRPTVC。初步证明基于化学合成肽EYWYCLSWRTGC的ELISA方法可用于检测抗A IgG（敏感度0.791和特异性0.793），IgM（敏感度0.881和特异性0.800）。初步证明基于噬菌体展示的EYWYCLSWRTGC具有滤除抗A的效果（p<0.01）。为了获得更多的新颖A抗原模拟肽，本研究还通过其他噬菌体文库研究了血型A抗原的模拟肽。本研究结果为发展新型的血型抗A检测方法和滤除材料提供了数据基础，为研究其他血型抗体的检测及滤除方法提供了新的思路。