miR-425促进肝癌复发转移的作用及其分子机制研究

The recurrence/metastasis is the critical factor that restrict the improvement of long-term outcomes of Hepatocellular carcinoma (HCC), and its molecular mechanism is still unclear. Abundant evidences showed that miRNAs paly important roles in regulating recurrence/metastasis of HCC. Previously, we found that the expression level of miR-425 was highly elevated in HCC tissues, and positively correlated with the invasion and metastasis potential of HCC. miR-425 silence could inhibit the invasion and migration of HCC cells in vitro. Based on these results, we will first analyze the relationship of miR-425 expression levels with clinicopathologic characteristics and prognosis of HCC. Then, through lentivirus-mediated miR-425 overexpression or knockdown, the biological function of miR-425 was investigated by using growth curves, colony formation assay, wound healing assay, Transwell invasion assay and in situ xenograft nude mouse model. Combination the techniques of bioinformatics, antibody array and dual-Luciferase reporter assay, we screen and identify the key downstream target of miR-425, and elucidate the molecular mechanism of miR-425 underlying the development and progression of HCC. Finally, with in situ xenograft nude mouse model, the value of miR-425 targeted therapy was evaluated. In conclusion, the present study will elucidate the biological function and molecular mechanism of miR-425 in regulating the recrurrence/metastasis of HCC, which could provide novel idea and experimental fundation for developing new strategies to prevent and treat recurrence/metastasis.

复发转移是制约肝癌整体治疗水平提高的关键，其分子机制仍未完全阐明。miRNAs在肝癌复发转移调控中具重要作用。我们前期发现，miR-425表达在肝癌组织中显著上调，并与肝癌的侵袭转移潜能呈正相关，沉默miR-425可在体外抑制肝癌的侵袭运动能力。本项目拟在前期研究基础上，利用慢病毒介导的miR-425过表达或沉默技术，通过生长曲线、集落形成、划痕愈合、Transwell侵袭、裸鼠原位成瘤等实验，深入研究miR-425在肝癌发生发展中的作用；生物信息学分析、蛋白芯片、双荧光素酶报告基因等技术，筛选鉴定其下游靶基因，阐明miR-425调控肝癌发生发展的分子机制；利用裸鼠原位肝癌模型，探讨靶向miR-425在肝癌干预治疗中的潜在价值。本研究旨在阐明miR-425在肝癌复发转移过程中的作用及其分子机制，为临床研发预防、治疗HCC复发转移的有效措施，提供新的研究思路和实验基础。

手术系当前肝癌的首选治疗方法，但术后复发转移率居高不下，5年的复发转移率超过70%。复发转移已成为当前制约肝癌整体治疗水平提高的关键。miRNAs在肝癌复发转移调控中具重要作用。. 我们研究发现，miR-425在肝癌组织中呈显著性高表达（中位上调倍数8.9），且其表达水平与肝癌的结节数目、微血管侵犯、TNM分期及BCLC分期显著相关（p < 0.05）。预后分析证实，miR-425高表达组患者的总生存时间和无瘤生存时间均显著劣于低表达组（平均生存时间：41.6月 vs 31.0月，p < 0.001；平均无瘤生存时间：36.0月 vs 24.4月，p < 0.001）。多因素回归分析证实，miR-425高表达、微血管侵犯、TNM分期及BCLC分期系肝癌预后的独立危险因素。. 体外研究证实，miR-425在高侵袭转移能力的HCCLM3细胞中的表达显著高于低侵袭转移能力的SMMC-7721细胞。我们采用慢病毒分别沉默HCCLM3细胞和过表达SMMC-7721细胞中miR-425的表达，与对照组细胞HCCLM3vector细胞相比，HCCLM3anti-miR-425细胞的划痕愈合能力和侵袭转移能力显著下，而两者的集落形成能力及增值潜能并无显著差异；而SMMC-7721-miR-425细胞的划痕愈合能力和侵袭转移能力均显著高于SMMC-7721vector细胞，两者的集落形成和增值亦无显著性差异。我们通过生物信息学方法筛选miR-425细胞的潜在靶基因，western-blot发现miR-425可抑制PTEN、TIMP2和SCAI的蛋白表达，荧光素酶报告基因证实，PTEN和SCAI系miR-425的靶基因。拯救实验证实，恢复SCAI的表达可完全逆转miR-425的生物学功能，而PTEN仅能部分逆转miR-425的生物学功能。进一步研究证实，SCAI可体外调控PTEN的蛋白表达。研究发现，miR-425可通过靶向SCAI调控integrin β1-Src-Fak-RhoA/CDC42、PTEN-AKT信号通路调控肝癌细胞的侵袭转移。体内研究亦证实miR-425可体内抑制肝癌细胞的侵袭转移能力。. 我们研究证实miR-425可在体内外促进肝癌的侵袭转移，miR-425可作为肝癌复发转移防治的有效靶点。