脑瘫鼠脑内微环境对神经干细胞移植的影响及头部电针干预作用的机理研究

课题组前期研究证实：对脑瘫（CP）早期干预可促进大脑再塑与功能重组，与细胞、分子、基因调控作用相关；与脑内微环境相关。本研究针对神经干细胞（NSCs）移植治疗脑瘫存在的存活、迁移、分化等问题，采用电针刺激头部运动区，旨在激活移置的NSCs并产生良性诱导，同时营造适宜其生存的微环境，促进其增值、分化，重塑神经环路。本课题组拟通过电镜观察神经突触的超微结构；扩散张量纤维束成像（DTT）无创活体观察脑白质纤维束分布与走形；现代分子生物学技术检测微管联合蛋白-2（MAP-2）、烯醇化酶（NSE）表达和脑内微环境中髓磷脂碱性蛋白（MBP）、神经营养因子（GDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）含量变化以及钾、钠、钙-ATP 酶的活性，以证实电针刺激头部运动区对移植NSCs的增殖、分化具有直接诱导作用和通过调控微环境的间接促进作用。为应用NSCs移植治疗脑瘫提供新的思路。

脑瘫是目前儿童致残的主要疾病之一，给个人、家庭、社会带来极大影响。提高脑瘫综合治疗水平，最大限度地恢复患儿肢体功能，使其重返社会是目前急需研究的重要课题。针对目前临床上单纯干细胞移植治疗脑瘫过程中，存在着影响临床疗效的有关干细胞移植后的存活、迁移、分化等问题，课题组在以往研究成果基础上，选用临床已公认治疗脑瘫有显著疗效的电针刺激头部运动区疗法作为辅助干预手段以克服单纯干细胞移植治疗脑瘫存在的缺陷，研究结果证实，实现了预期研究目标。.课题组采用BBB运动功能等级评分法对实验脑瘫大鼠进行运动功能评估，与模型组比较，头针组得分较高，有显著性差异（p＜0.05）；神经电生理测试显示头针组的α波和β波在实验早期脑电生理活动明显增强，与模型组比较，有显著性差异（p＜0.05）；NMRS扫描结果分析提示电针组的实验大鼠脑组织水的弥散情况有所加强，组织液交换得到提升、新陈代谢水平上升；头针组的DTT图像分析结果与模型组比较，实验大鼠脑白质神经纤维束随疗程时间的延长，神经纤维束逐渐增多、增粗，说明电针刺激头部运动区可以有效促进脑瘫大鼠损伤后的脑白质神经纤维束恢复；与干细胞组比较，头针+干细胞组的脑瘫鼠脑内移植的人间充质干细胞表面标记物（CD29，CD44）表达明显，有显著性差异（p＜0.05），证明电针刺激头部运动区可明显提高移植干细胞在脑内的存活率，对移植干细胞的增殖与分化具有直接诱导作用。采用Western Blot方法对实验大鼠脑内微环境中的神经生长相关蛋白MAP—2、NSE、MBP、GDNF、bFGF检测，与模型组、干细胞组比较，头针+干细胞组在 1W、2W时MAP—2、NSE、MBP表达显著，有统计学意义（p＜0.05）；采用定磷法、微孔板检测结果证实头针组的Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性与模型组比较有明显升高，有显著性差异（p＜0.05），说明电针刺激头部运动区可以调控脑内微环境，为移植干细胞的增殖、分化创造了有利条件。.上述研究结果证实：电针刺激头部运动区具有促进中枢神经损伤后的修复，恢复肢体功能的作用；可以提高脑的电生理活动；可明显提高移植干细胞在脑内的存活率，对移植干细胞的增值与分化具有直接诱导作用；多项实验指标证实电针刺激脑瘫鼠头部运动区对移植干细胞的存活、分化是通过调控脑内微环境来实现的；DTT扫描技术可以无创对脑瘫作出早期诊断和病情