BCL6通过靶点GRB2介导CABG术后静脉移植物再狭窄的作用及机制研究

Looking for effective targets to delay the graft intima hyperplasia and restenosis after coronary artery bypass are the key and difficult point. Antagonism of the Ras/MAPK signal pathway could effectively inhibit smooth muscle cell proliferation to alleviates vascular intimal hyperplasia. GRB2 can be mediated the activation of MAPK signaling pathways by Ras activate the Raf-1. Inhibits GRB2 expression can reduce the excessive activation of MAPK signal pathway caused by inflammation signal and alleviate the excessive proliferation of smooth muscle cells, delay the restenosis after coronary artery bypass grafting. This study will use the mice with specific BCL6 knockout in smooth muscle cell, by cytology, molecular biology, pathology and other technology to clear the role and mechanism of BCL6 in the process of neointimal hyperplasia mediated by Ras/MAPK signal pathway, to provides a new theoretical basis for clinical treatment after coronary artery bypass graft surgery.

寻找有效靶点，延缓冠脉搭桥术后移植物内膜的过度增生和再狭窄，是目前国际上研究的重点和难点。拮抗Ras/MAPK信号通路能够有效的抑制平滑肌细胞增殖引起的血管内膜增生。GRB2能够介导Ras活化Raf-1激活MAPK信号通路，下调GRB2的表达能够抑制炎症信号引起的Ras/MAPK信号通路的过度激活，减轻平滑肌细胞过度增殖引起的血管内膜增生，延缓冠脉搭桥术后移植物的再狭窄。本研究将通过特异性敲除平滑肌细胞内BCL6，采用细胞学、分子生物学、病理学等技术来明确BCL6在血管内膜增生过程中对Ras/MAPK信号通路的作用机制，为冠脉搭桥手术后的临床治疗提供了新的理论依据。

本研究利用小鼠构建下腔静脉移植模型，观察到了BCL6通过抑制GRB2蛋白分子调控Ras/MAPK信号通路中Raf-1、ERK1/2的磷酸化激活，进而抑制静脉移植物新生内膜的增生。在本研究中，我们观察到随着移植时间的延长，静脉移植物内膜逐渐增厚，BCL6在移植物中的蛋白表达水平下降，Ras、Raf-1、ERK1/2的蛋白及mRNA的水平未见明显变化，而磷酸化的p-Raf-1、p- ERK1/2含量升高。使用BCL6的特异性抑制剂FX1干预后，上述差异会加重。因此，BCL6是调控静脉移植物狭窄的重要分子，并且这种调控是通过抑制Raf-1、ERK1/2的活化（磷酸化）而实现的。通过平滑肌特异性BCL6敲除小鼠（SM-22 Cre+/-BCL6 floxp-/-小鼠）构建下腔静脉移植小鼠模型，观察到敲除平滑肌细胞内的BCL6能够加重静脉移植物的内膜增生，平滑肌细胞的增殖以及合成细胞外基质的活性显著增强。与此同时，在主动脉环缩小鼠模型中，我们观察到SM-22Cre+/-BCL6floxp-/-小鼠术后心肌间质α-SMA阳性细胞显著增多。这说明，BCL6在高血压心脏病引起的心肌纤维化中也具有调控作用，在后续的研究中可以进一步探索。.综上所述，本课题明确了BCL6通过抑制GRB2下调Ras/MAPK信号通路，能调抑制平滑肌细胞在静脉移植物内膜增生中的作用，抑制BCL6能促进平滑肌细胞的增殖，加重静脉移植物内膜过度增生的发生与进展，上调BCL6则相反。该项目对于明确BCL6在CABG术后静脉移植物内膜增生中的作用具有极其重要的理论和实际意义，为寻找相关治疗靶点，防治冠脉搭桥术后静脉移植物的再狭窄，提高CABG的远期疗效提供了新的理论基础。