枯否氏细胞介导的炎症通路在NAFLD肝损伤中的作用及参葛方干预的机制研究

Previous studies have shown that "Shenge decoction" with therapeutic principle of “strengthening spleen and eliminating dampness” can reduce total cholesterol and FFA levels in serum, and has anti-lipid peroxidation, improving liver inflammation. "Shenge decoction" embodies the advantages of traditional Chinese Medicine for the treatment of NAFLD. Kupffer cells (KC) is the main immune cells in the pathogenesis of NAFLD. And KC mediated inflammatory pathway is a new understanding of NAFLD main pathological mechanism, including three aspects: (1) the number and morphological changes of KC; (2) cytokines function; (3) phagocytic function. Therefore, we propose the research hypothesis: In NAFLD, "Shenge decoction" reduces the NAFLD liver inflammation through regulation of KC signaling pathway. Around the liver KC downstream TLR4-NF-κB signal pathway, building the NAFLD model mice Induced by high fat diet and FFA treated mice liver cell model KC to investigate the number and morphological changes of KC and the changes of the expression of TLR4 and secretion of TNF-α, IL-6, IFN-γ on KC by “Shenge Decoction”. Some mechanism by this research can explore "Shenge Decoction" in the treatment of NAFLD, elaborate the main advantages of traditional Chinese medicine in prevention and treatment of NAFLD link.

前期研究证实:以“健脾利湿法”为治则的参葛方是治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的有效方剂，能降低血清中总胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，改善肝脏炎症，体现中药保肝降脂的优势。结合“肝脏枯否氏细胞(KC)是NAFLD发病中最主要的免疫细胞，KC通过数量形态变化、细胞因子和吞噬功能三方面作用介导的炎症通路是NAFLD主要病理机制的新认识”，提出研究假说“参葛方通过调控KC相关信号通路减轻NAFLD肝脏炎症”。拟采用单纯高脂饮食诱导NAFLD小鼠模型和FFA处理小鼠肝脏KC模型，围绕肝脏KC下游TLR4—NF-κB信号通路，观察参葛方对肝脏KC 的数量形态变化和KC介导的TLR4—NF-κB信号通路参与调控NAFLD肝脏炎症，检测参葛方对肝脏KC上TLR4表达及其TNF-α、IL-6、IFN-γ的表达变化，证实参葛方对KC相关信号通路的调控作用，以探讨参葛方防治NAFLD肝损伤的主要优势环节。

课题采用单纯高脂饮食诱导的NAFLD小鼠模型和FFA处理小鼠肝脏细胞模型，从整体模型及细胞模型两个角度，着重围绕肝脏枯否氏细胞介导的炎症信号通路的关键环节，验证参葛方对KC介导的炎症信号通路的调节作用，以阐释该方治疗NAFLD的关键靶位和机制，为今后研发新药奠定基础。.对照研究计划，课题实施进展顺利，完成了任务书计划中单纯高脂饮食诱导的小鼠脂肪肝模型和FFA处理小鼠肝脏细胞模型相关实验。对照原定的考核指标，已基本达到预期目标。研究获得以下主要结论：①高脂饲料喂养至第12周时肝组织出现明显的脂肪变性，血清ALT、TC及LDL升高，肝组织TG水平升高，成功建立了单纯高脂饮食诱导的小鼠脂肪肝模型；②参葛方可显著改善单纯高脂饮食诱导的脂肪肝模型小鼠肝脏脂肪变性及糖脂代谢，显著减轻肝脏炎症。③参葛方药物血清或直接添加均可显著降低FFA 诱导的肝细胞脂肪含量、改善肝细胞脂肪变性。④参葛方组LPS及TNF-α有下降趋势，KC数目有下降趋势，但没有统计学意义。经过专家咨询论证和进一步实验研究，肝组织、原代肝细胞上存在TLR，而原代KC则TLR4含量在正常组及模型中并无显著差异。遂后续的细胞实验改用HepG2细胞系进行实验。.参葛方可通过降低TLR4的表达来减轻肝脏炎症损伤，但可能不是通过TLR4-IRAK -4信号通路，参葛方可使AMPK磷酸化，抑制SREBP-1c的表达，降低脂肪生成基因的表达，导致肝脏TG合成下降，肝脏脂肪合成减少，缓解肝脏脂肪变性，这可能是其抗损伤作用的主要机制。在此基础上，将会进一步深化研究参葛方对激活免疫炎症信号通路TLR4/NF-κB对脂肪细胞能量代谢调节系统AMPK的活性及脂代谢影响的相互作用。.同时发表标注相关论文3篇，另有3篇已收到录用通知。作为副主编完成相关论著一本。参加学术会议交流4次；培养研究生2名研究阐释中药组分复方治疗参葛方NAFLD的关键靶位和机制，也将为探索成分明确、有自主知识产权、并可进一步提高疗效的抗脂肪肝中药组分复方制剂提供坚实的理论依据。