吴茱萸生物碱抑制大鼠血管平滑肌增殖及抑制心肌肥大作用的研究

贵州盛产中药吴茱萸，目前吴茱萸在我国药业主要作为原药材、保健药或粗制剂使用，产品技术含量不高，经济价值较低，有待深入研究和开发。我们初步研究发现吴茱萸次碱产生明显抗血管平滑肌细胞（VSMC）增殖作用；吴茱萸碱抑制心肌细胞肥大作用；吴茱萸提取物具有抗实验性心肌肥厚效应，有关这方面的研究国内外未见报道。本项目拟在此基础上，通过离体和在体实验比较三种生物碱并筛选出活性强，毒性小，兼有抗VSMC增殖和抑制心肌肥厚效应的成分，深入挖掘其潜在的防治心血管重构疾病的临床应用价值，并为提高原药材的经济价值提供广阔的前景。通过其对细胞内钙离子、一氧化氮、相关基因及细胞周期的影响，以及其抗VSMC增殖和抗心肌肥大作用与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、钙调神经磷酸酶（CaN）介导的信号传导通路之间关系的研究，阐明其作用机制。

血管内膜增生是介入治疗后再狭窄的主要病理机制，目前认为血管内皮功能障碍与损伤，导致VSMCs的异常增殖，并向内膜迁移、增殖导致血管内膜增生。心肌肥大是在压力和容量超负荷及神经体液因子等多种病理因素刺激下，发生心肌细胞体积增大、细胞间质增生病理学改变，其发病机制和防治的研究一直是该领域的研究热点。. 吴茱萸碱(Evo)、吴茱萸次碱(Rut)和吴茱萸总碱(ETA)小鼠单次灌胃最大给药量5 g／kg，连续观察14 d，未见明显毒性。采用SD大鼠培养血管平滑肌细胞（VSMC），结果表明Evo抑制VSMC作用略高于Rut，ETA浓度过高可产生细胞毒作用。Rut（0.3–3.0 μmol/L）、Evo（0.1- 1.0μmol/L）明显抑制AngⅡ诱导的大鼠VSMCs的增殖，使细胞周期被阻滞于G0 /G1，其抑制作用与Evo促进一氧化氮（NO）的合成相关。.Evo（40、80 mg / kg）、Rut和ETA（50、75 mg / kg）对颈动脉内膜球囊损伤大鼠，连续灌胃给药14 d。各生物碱抑制内膜增生，能明显提升血浆NO和cGMP含量；下调c-myc、ERK2、PCNA mRNA和p-ERK2蛋白的表达，上调eNOS、MKP-1 mRNA和MKP-1蛋白的表达。提示抑制内膜增生与促进NO产生和抑制MAPK/ ERK2信号通路有关。. 采用大鼠原代心肌细胞培养法，结果显示三种生物碱抑制心肌细胞肥大效应无明显差异，作用与促进NOS活性和NO 的产生；抑制CaN信号通路有关。.腹主动脉缩窄制备大鼠左室肥厚模型。ETA、Evo（20、40 mg/kg）预防或疗给药4周，均明显抑制大鼠因腹主动脉缩窄所致左室重量（LVW）、左室肥厚指数（LWHI）的增加，左室内压峰值（LVSP）、左室舒张末压（LVEDP）的升高和左室压力最大变化速率（±dp/dt max）的降低；明显减轻心肌组织形态及细胞超微结构的损伤。ETA和Evo通过促进 NO 释放；抑制CaN、MAPK参与的心肌肥厚信号通路，产生防治心肌肥大作用。. 上述吴茱萸生物碱的研究无疑对心血管重构疾病的防治提供新型药物，进行了有益探索。再者，目前吴茱萸的临床使用多为中药材和粗制剂，科技含量低，药用价值有待提高，项目研究为吴茱萸生物碱潜在的临床药用价值提供了可靠的试验证据。