多发性骨髓瘤干细胞Nanog信号通路差异蛋白筛选及干扰

随着抗多发性骨髓瘤(MM)新药的逐渐应用，MM缓解率明显提高。由于目前尚无有效清除骨髓瘤干细胞的药物，所以患者终将复发。国外学者发现，Nanog是维持干细胞特性的关键蛋白之一，阻断Nanog信号通路可抑制肿瘤增殖，而在人骨髓瘤干细胞中，Nanog及其调节蛋白的作用尚不清楚。我们前期的研究发现，MM患者骨髓中表面标志为CD20+CD27+CD138-的侧群细胞Nanog高表达，其调控及功能尚不清楚，为此，本课题拟选用新诊断多发性骨髓瘤患者，以侧群细胞法联合免疫磁珠法筛选骨髓瘤干细胞、正常干细胞和骨髓瘤细胞，利用多维液相色谱-离子阱串联质谱技术筛选骨髓瘤干细胞Nanog信号通路中的差异蛋白，搜索数据库鉴定差异蛋白，siRNA干扰差异蛋白转录本，干扰其表达，检测干扰后骨髓瘤干细胞生物学特性改变，期望发现抑制骨髓瘤干细胞的靶位点，为寻找新的MM治疗途径提供理论依据。

骨髓瘤干细胞参与多发性骨髓瘤(MM)的复发、耐药，目前尚无有效清除骨髓瘤干细胞的药物，所以患者终将复发。本课题拟分选骨髓瘤干细胞，筛选其特异性差异蛋白，期望发现抑制骨髓瘤干细胞的靶位点。结果发现，应用SP法顺利分选出原代骨髓瘤和RPMI 8226细胞系中的侧群(SP)细胞和非SP(NSP)细胞，应用免疫磁珠法分选顺利分选出NCI-H929细胞中CD20+的骨髓瘤干细胞和CD20-的骨髓瘤细胞；SP细胞与NSP细胞免疫表型有明显差异，且自我更新及分化能力较NSP细胞强，CD20+细胞与CD20-细胞免疫表型有明显差异，且自我更新及分化能力较CD20-细胞强；SP细胞、CD20+细胞和NSP细胞、CD20-细胞蛋白表达谱具有明显差异，在骨髓瘤增殖、凋亡相关蛋白表达谱方面具有其自身特点，通过干扰NANOG及SOX2基因表达，未能有效抑制骨髓瘤细胞增殖，能有效抑制骨髓瘤干细胞增殖的靶点还需进一步研究。