桉叶多酚抗氧化成分提取分离及其抗氧化作用机理研究

桉树是我国重要的用材林木，种植面积大，年产桉树叶的生物量非常巨大，桉树叶提取物具有很强的生物活性功能。我们的前期研究显示提取物中多酚类物质含量非常高，而且抗氧化活性很强，两者之间存在计量依赖关系，因此桉叶中的多酚是一种潜在的高效天然抗氧化剂。但是，桉叶多酚作为抗氧化剂的应用还很少，究其原因在于：桉叶多酚结构复杂，分离难度大，难以得到纯品，结构和抗氧化机理不明确等。本项目拟通过抗氧化活性跟踪的方法从桉叶中高效提取强抗氧化活性物质，通过极性梯度、新型填料柱层析制备色谱等方法分离纯化获得高活性抗氧化单体，利用色谱-质谱联用、核磁、红外等分析方法对其进行结构鉴定，采用电子自旋共振法、清除自由基能力检测、对抗氧化酶活性的影响和细胞抗氧化法等方法，系统地探讨其抗氧化机理。本项目的成功实施，将会为桉叶多酚作为天然抗氧化剂的推广应用提供理论基础。

本项目以广林九号桉树叶为研究对象，运用活性追踪方法，对其抗氧化活性成分进行了系统的研究，包括对桉树中主要多酚成分进行种质资源筛选与植物化学分类、单体分离纯化、结构鉴定、抗氧化活性、活性单体含量、抗衰老作用、抗衰老分子作用机制，并拓展了抗肿瘤研究，采用实验模型包括化学、细胞、秀丽线虫、动物（小鼠和蛋鸡）等。取得的研究结果如下：桉叶多酚对小鼠的急性乙醇氧化损伤的肝脏有明显的保护作用；桉叶多酚作为蛋鸡饲料抗氧化剂，改善了鸡蛋和鸡肉的各个体内抗氧化指标，并对慢性乙醇氧化损伤的肝脏有明显的保护作用；分离及鉴定得到12种单体，其中9种单体在DPPH•，ABTS•+ 和 ORAC等化学抗氧化分析中显示具有强抗氧化活性；研究了6种活性单体对秀丽线虫寿命的影响，结果表明，PGG和OEB提高野生型秀丽线虫的平均寿命高达22%；PGG与OEB抗衰老作用机制研究表明，PGG与OEB明显增强机体热抵抗能力，PGG与OEB提高线虫寿命作用机制综合了胰岛素和类胰岛素生长因子-１（age-1,daf-16），热量摄取（eat-2），Sir-2.1途径（sir-2.1）和线粒体功能（isp-1）等信号通路，可见PGG/OEB是通过多靶点而达到延长线虫寿命的作用；PGG对结肠癌HCP-116细胞半致死率为6.25µmol/L,有很强的促进细胞程序性死亡的作用，对细胞周期主要为S期阻滞。