CLEC4M传播HCV的分子机制及其诱导病毒逃逸免疫应答研究

DC细胞通过其表面分子CD209捕获HIV抗原，在呈递抗原的同时又直接将HIV传递给表达其配体的靶细胞，成为病毒的传播者。目前HCV感染路径尚不完全清楚，最新发现，CD209类似物CLEC4M可有效捕获HCV E2蛋白，肝窦内皮细胞又大量表达CLEC4M，提示HCV感染中可能存在病毒直接传播于靶细胞的路径，这可能是病毒逃逸免疫攻击，使丙型肝炎易于慢性化的重要原因。本研究拟从人PBMC中获取CLEC4M，使之与HCV抗原共孵育，观察CLEC4M对HCV抗原的捕获作用，研究CLEC4M负载HCV后的功能变化；利用转染表达CLEC4M的肝癌细胞株与HCV抗原共孵育，观察CLEC4M对肝细胞摄取HCV的影响。阐明CLEC4M在HCV传播中的作用，探索HCV早期感染的具体路径；弄清负载HCV的CLEC4M对诱导机体免疫应答水平的影响及其T细胞的分子免疫调控机制，将为关键环节设计新型靶向药物奠定基础。

本项目主要研究DC细胞通过其表面分子CD209捕获HCV抗原，在呈递抗原的同时又直接将HCV传递给表达其配体的靶细胞，成为病毒的传播者。目前HCV感染路径尚不完全清楚，最新发现，CD209类似物CLEC4M可有效捕获HCV E2蛋白，肝窦内皮细胞又大量表达CLEC4M，提示HCV感染中可能存在病毒直接传播于靶细胞的路径，这可能是病毒逃逸免疫攻击，使丙型肝炎易于慢性化的重要原因。本研究拟从人PBMC中获取CLEC4M，使之与HCV抗原共孵育，观察CLEC4M对HCV抗原的捕获作用，研究CLEC4M负载HCV后的功能变化；利用转染表达CLEC4M的肝癌细胞株与HCV抗原共孵育，观察CLEC4M对肝细胞摄取HCV的影响。阐明CLEC4M在HCV传播中的作用，探索HCV早期感染的具体路径；弄清负载HCV的CLEC4M对诱导机体免疫应答水平的影响及其T细胞的分子免疫调控机制，将为关键环节设计新型靶向药物奠定基础。研究内容包括：1.体外CLEC4M的提取、活化及鉴定；2.建立表达HCV不同抗原的转染细胞；3.观察CLEC4M对HCV不同抗原的捕获作用；4.研究DC通过CLEC4M负载HCV后功能变化;5.阐明CLEC4M对肝细胞摄取HCV的影响。研究结果：1.检测了慢性HCV感染者外周血PBMCs中CLEC4M/CD14的表达率，HCV初治患者中CLEC4M/CD14的表达明显高于健康对照组、EVR组和SVR组，健康对照组、EVR组、SVR组各组表达率无显著性差异；2.构建了稳定过表达人CLEC4M的Huh7.5细胞。应用HCV细胞体外培养系统（HCVcc）感染过表达CLEC4M的Huh7.5细胞，提高了HCVcc的易感性；3.诱导成熟DC的培养，检测CLEC4M在成熟DC表面的表达。本项目在最新研究结果提示CLEC4M是HCV结合受体的基础上，研究CLEC4M负载HCV后功能的变化，包括本身形态的改变，成熟状态、对诱导机体免疫应答水平的影响等以丰富HCV研究内涵。首次研究负载HCV的CLEC4M对HCV感染靶细胞（肝细胞）的粘附作用，研究CLEC4M对肝细胞摄取HCV功能的影响，阐明CLEC4M在HCV感染中的分子作用机制，探索HCV感染靶细胞的具体路径。