PERK-eIF2a通路在IBS-D肠黏膜屏障中的作用及痛泻要方体内代谢后“成分群”的干预机制

Diarrhea irritable bowel syndrome(IBS-D）has seriously affected health and quality of life of patients.It may be important pathogenesis in development and recurrence of the process of IBS-D,excessive reticulum stress (ERS)activated PERK-eIF2α pathway and damaged intestinal mucosal epithelial Barrier.Tongxieyaofang(TXYF) had obtained satisfactory effect in treating IBS-D in clinic and previous study, but it is unknown that herbal fomula how to work.This project applys metabonomics method to detect plasma metabolites for patients after treatment, rat model combined syndrome with disease, using molecular biology research methods to explore the function of ERS inducing damage in IEC and probable pathological mechanism,and to determine the effects of the”multiple ingredients “of TXYFin the body.

肠易激综合征腹泻型（IBS-D）严重影响患者的健康和生活质量。肠上皮细胞过度应激（ERS）激活PERK-eIF2a通路可能是损害肠道黏膜屏障，导致IBS-D发生的重要发病机制。痛泻要方治疗IBS-D在临床上取得了较好的疗效，但其作用机制不明。本项目以痛泻要方为研究对象，考察其在人体的代谢情况，通过药物代谢组学手段，将内源药效标志物与药效药理指标相结合，经肝肠循环后血浆中的代谢物分析，确定体内“多重起效”的药效成分（群），同时采用病证结合模型大鼠对其相关作用机制进行研究，揭示痛泻要方的可能作用机制，为中药复方的基础研究提供新的思路，为进一步的临床应用提供指导。

肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是一种世界范围内的多发病，其中以腹泻型 (IBS-D)所占比例最大。研究发现肠上皮细胞过度应激（ERS）激活PERK-eIF2a通路可能是损害肠道黏膜屏障，导致IBS-D发生的重要发病机制。痛泻要方治疗IBS在改善临床症状和提高患者生活质量方面有特色和优势，可以调节IBS患者体内的氨基酸代谢、改善患者血清中IL-6、IL-8、TNF-α的含量。本课题通过采用新生母子分离+三硝基苯磺酸结肠灌注+不可预知多重应激后，建立了符合PI-IBS特点的病证结合的动物模型，并对模型从体重、进食量、抓力、活动度、大便含水量、内脏敏感性及结肠组织病理状态等方面进行了综合评价。对中药复方疗效机制研究：1、IBS-D可由内质网应激致PERK-eIF2a通路激活并致使黏膜屏障损伤，同时伴有氨基酸代谢失常。痛泻要方可以调节PERK-eIF2a通路的表达，改善大鼠肠黏膜屏障功能。2、痛泻要方可以调节内质网自噬水平，有上调自噬相关蛋白LC3II/I，下调p62促进自噬小体的产生及内质网自噬的趋势，进而缓解内质网应激，下调内质网应激标记蛋白GRP78，起到对内质网稳态及细胞稳态的调节作用。3、痛泻要方可以起到上调凋亡抑制蛋白Beclin-1的作用，对紧密连接蛋白Claudin-4、Occludin，黏附连接蛋白E-Caderhin的表达也具有上调趋势，可能是通过抑制因内质网应激而引起的细胞凋亡，增强肠道黏膜屏障，降低肠道通透性。本项目初步明确了内质网应激致PERK-eIF2a通路激活并致使黏膜屏障损伤在炎症后IBS-D中的意义；揭示中药疏肝健脾干预内质网应激，调节PERK-eIF2a通路的表达，改善氨基酸体内代谢的作用机制。本课题为中药复方治疗IBS提供了全新的治疗靶点。