基于蒙医三子汤为核心的系列方剂改善微血管作用及对CIA大鼠模型新生血管的影响

Rheumatoid arthritis (RA) is recognized as intractable diseases. Previous studies of our team show that the articular inflammatory index, inflammatory cytokines and MMP of collagen-induced arthtitis rat model can be restrained effectively by Mongolian medicine Zhongluna decoction ( Sanzi decoction combined with Kushen and Leizhuhua ).On the basis of those results, exploring the related literature, it is wondered that if Sanzi decoction and Sendeng-4（Sanzi decoction combined with Wenguanmu )which related to Zhongluna decoction work for CIA rat model? Not yet get any deeply reports about the magical effect of separating healthy blood and ill blood by the basic prescription Sanzi decoction have not been reported yet. .This study employs the core pathological mechanism of RA, "neovascularization", as breakthrough point. Aims at exploring the rationality and scientific nature of Mongolian medical prescription composition theory, providing experimental bases for optimized formula, increasing scientific connotation and creating a new approach for RA clinical treatment. Using series prescriptions of Sanzi decoction, Sendeng-4 and Zhonglun-5 as treatment drug, and tripterygium as control drug, to observe the effect of pathophysiologic indicators, such as different prescriptions affecting on CIA rat about synovial joint pathology, microvessel density (MVD), changes of blood flow and blood clotting, proinflammatory cytokines, interferons and abnormal proliferation of endothelial damage etc, by methods of imageology, ELISA, Immunohistochemistry(IHC), Western Blot, Serum pharmacology and flow cytometry etc.

类风湿关节炎（RA）是公认的难治性疾病，本团队前期的研究表明蒙药忠伦阿汤（三子汤加苦参、肋柱花）能有效抑制胶原诱导性关节炎（CIA）鼠模的关节炎性指数，炎性细胞因子、基质金属蛋白酶等，在此基础上，挖掘梳理相关古籍文献，与其关系密切的三子汤、森登-4（三子汤加文冠木）对 CIA鼠模是否有效？基础方三子汤 “分离恶血和正血”的神奇功效，却未见深入报道。本研究拟建立CIA关节炎大鼠模型，以RA病理核心机制“新生血管形成”为切入点，采用影像学、ELISA，免疫组化、Western Blot、血清药理、流式细胞等，以三子散、森登-4、忠伦汤-5系列方进行干预，设雷公藤为阳性对照，从血液、组织、细胞培养等层次，观察不同方药组对CIA鼠模关节滑膜病理、微血管密度、血流及凝血变化，致炎因子、干扰素及与血管内皮损伤异常增殖等指标的影响，并对系列方进行初步拆方比较，探讨蒙医方剂配伍理论的合理与科学性，并为优化

蒙药三子汤具有分离清浊血液等功效，在治疗关节痛的病症方面，以该方为基础的常用方剂有森登4汤和忠伦5汤，三个复方在治疗类风湿关节炎（RA）方面疗效显著。本课题研究三个复方改善微血管作用及对CIA大鼠模型新生血管的影响。通过建立小鼠血栓模型和DIC大鼠模型，观察三子汤的抗血栓、抗凝作用，结果显示三子汤能减少小鼠黑尾长度，能降低大鼠血清中TM、F1+2、β-TG、D-D、vWF的表达。建立CIA大鼠模型，HE染色观察踝关节的病理改变结果显示三个复方能缓解滑膜增生和血管新生；ELISA显示三个复方能降低TM、D-D、vWF的含量，以三子汤高剂量、森登-4和忠伦-5汤的中、高剂量效果显著，三个复方均能降低VEGF、eNOS含量，以中、高剂量为佳，忠伦-5汤能明显降低tPA含量；免疫组化显示森登-4和忠伦-5汤的高剂量能明显降低IL-1β、IFN-γ、VEGFA和HIF-的表达；Western blot结果显示三个复方能降低Ang-2的表达，三子汤、森登-4汤的中剂量能降低Tie-2的表达。体外实验结果显示三个复方含药血清都能抑制RA-FLS和HUVEC的增殖，以10、20%浓度最佳；都能降低VEGF、PLGF、Ang-1、Ang-2、VEGFR-1、VEGFR-2、Tie-2的含量，最佳浓度都为20%。在拆方实验中，ELISA显示栀子、诃子、川楝子、文冠木能降低血清中VEGF/VEGFR、Ang-1、Ang-2、Tie-2的含量，苦参碱和肋柱花能降低VEGF的含量，文冠木、苦参碱能降低eNOS的含量；免疫组化显示苦参碱能降低踝关节中IL-1β表达，文冠木和苦参碱能降低踝关节中IFN-γ表达；WB显示文冠木能下调VEGF、Ang-1、Ang-2的表达，苦参碱能降低Ang-1、Ang-2、Tie-2和p-Akt的表达，同时能降低RA-FLS中p-Akt的表达，抑制RA-FLS和HUVEC的增殖、迁移和管腔形成。综上，三子汤具有抗凝和改善血管内皮的作用，为其“分离恶血与正血”提供药理作用机制；森登-4汤和忠伦-5汤和三子汤相比，在缓解关节炎症方面具有增效作用。三个复方都能通过调控参与HIF-VEGF-Ang轴中的关键细胞因子发挥缓解CIA关节新生血管的作用，森登-4汤的作用靶点更多，文冠木和苦参可能分别是森登-4汤和忠伦-5汤发挥作用的主要药物。