斑马鱼与原始生殖细胞迁移相关新基因的克隆及功能研究

脊椎动物原始生殖细胞（PGCs）迁移分子机理的研究是发育学领域研究热点之一。本项目拟采用酵母双杂交技术，从斑马鱼早期胚胎cDNA文库中，筛选与PGCs迁移相关调控因子（Nanos1、Pumilio和SSB4）相互作用蛋白；用GST Pull-down和免疫共沉淀等方法，分别确定Nanos1、 Pumilio和SSB4与侯选因子之间的相互作用及其结合区域，探讨它们所涉及的局部信号调控网络；运用3'、5'RACE和生物信息学等方法，研究候选基因结构的特点；通过mRNA原位杂交和免疫组织化学等方法，检测其mRNA和蛋白质在斑马鱼早期胚胎发育过程中的时空表达谱；采用吗啉环、RNA干扰和过表达显性抑制等技术，研究候选基因的功能。完成本项目，将可能发现与PGCs迁移相关的重要的、新的基因；为研究调控动物性细胞迁移的分子机理提供重要的基础资料；为人类生殖细胞肿瘤发生的机理提供重要的启示。