有序定向复合缓释非病毒载体支架再生修复牙周组织

应用于组织工程的支架应该在结构和功能上模拟自然的细胞外基质结构，提供三维空间立体框架，控制和引导细胞朝特定的方向生长、分化。自然的牙周组织微观结构具有特定的排列方向。然而，牙周组织工程目前使用的支架的纤维排列随机无序、功能单一。基于这一现状，本课题将模拟自然的牙周组织的特定排列方向，构建有序定向支架。同时利用Coaxial electrospinning（同轴静电纺丝）技术，在支架上加载人PDGF-B和BMP-7基因的非病毒载体，使支架具有缓释基因非病毒载体的功能。然后，对这一支架进行理化性能和生物学评估。通过体外细胞接种培养，观察支架是否可以引导人牙周膜干细胞的排列方向，诱导细胞向成骨化和成纤维化增殖、分化。最后，通过建立小型猪牙周炎模型，观察支架的植入是否有利于重新创造有序的牙周组织微观结构，促进牙周组织有序再生。从而有利于促进组织工程技术在临床上的应用，提高牙周疾病的临床治疗水平。

应用于组织工程的支架应该在结构和功能上模拟自然的细胞外基质结构，提供三维空间立体框架，控制和引导细胞朝特定的方向生长、分化。自然的牙周组织微观结构具有特定的排列方向。然而，牙周组织工程目前使用的支架的纤维排列随机无序、功能单一。基于这一现状，本课题模拟自然的牙周组织的特定排列方向，构建有序定向支架。同时经过不同的转染试剂比较后，选择TurboFect Transfection Reagent作为转染试剂转染293T细胞，来构建慢病毒载体，转染PDGF-B和BMP-2基因至人牙周膜干细胞。通过体外细胞接种培养，扫描电镜和共聚焦电镜观察BMP2 基因转染后的hPDLSC沿有序定向支架的纤维方向有序生长；Alamar Blue结果显示细胞在有序排列支架纤维表面附着和增殖增强(P<0.05)；RT-PCR检测发现，3天时，接种在有序定向支架上的hPDLSC的BMP2，ALP， BSP， Col I，OCN， Runx2 的表达显著高于对照支架上的细胞（P<0.001）。7天时，在有序定向支架上的细胞的ALP， Col I基因表达高于对照组支架上的细胞(P<0.05)。说明支架纤维的有序定向排列不仅可引导细胞定向生长、附着和增殖，还能显著增强细胞基因重组和基因转染的效率，诱导hPDLSC定向分化，从而有利于重新创造有序的牙周组织微观结构，促进牙周组织有序再生。