凋亡基因(apoptin)修饰的脂肪来源间质干细胞靶向抑制肺癌作用研究

目前肿瘤基因治疗方法的有效性已在临床实验中得到了证实。 然而,针对具体实施方案,如载体和功能基因的选择、治疗模式等问题仍有待深入研究。间质干细胞是一种合适的细胞载体。Apoptin是一个选择性诱导肿瘤细胞凋亡的小分子蛋白质。那么，能否实现凋亡蛋白（apoptin）在间质干细胞中的稳定分泌表达并顺利进入肺癌细胞从而达到靶向性抑制肺癌的效果呢? 本课题组目前已成功获得凋亡蛋白cDNA编码序列和人脂肪来源间质干细胞, 拟在此基础上首次利用慢病毒载体系统将加有两种信号序列的apoptin基因导入脂肪来源间质干细胞中以获得稳定分泌表达apoptin的间质干细胞, 在体外确定其诱导原代肺癌细胞和肺癌细胞系凋亡的前提下, 进一步在动物体内验证其对皮下接种的肺癌细胞和转移至肺和肝脏组织中的肿瘤发生、发展的影响, 为apoptin修饰的间质干细胞能够走向临床治疗提供实验依据。

间质干细胞是一种合适的基因治疗用细胞载体。Apoptin是一个选择性诱导肿瘤细胞凋亡的小分子蛋白质。那么，能否实现凋亡蛋白（apoptin）在间质干细胞中的稳定分泌表达并顺利进入肺癌细胞从而达到靶向性抑制肺癌的效果呢? 为此本课题组首先采用原核表达系统通过亲和层析的方法获得了凋亡蛋白，并通过免疫BALB/c小鼠的方法制备了抗凋亡蛋白抗体。利用多克隆位点技术制备了真核表达载体pLV/Final-puro-EF1α-apoptin，并通过和结构质粒共转染293FT细胞的方法制备携带apoptin基因的慢病毒颗粒。经慢病毒颗粒感染的间质干细胞能够有效分泌携带有穿膜信号的凋亡蛋白并仍然保持一定的分化能力。接下来Apoptin基因修饰的间质干细胞的促肿瘤细胞凋亡能力通过体内体外实验的方法进行验证。首先与Apoptin基因修饰的间质干细胞共培养的肿瘤细胞与对照组相比发生了明显的细胞凋亡－细胞质内活化的caspase－3含量明显增多(16.5±2.9% at 24h & 27.3±2.0% at 48h vs 3.4±1.1% at 24h & 2.2±0.6% at 48h)。当肺癌细胞H460与Apoptin基因修饰的间质干细胞共同植入裸鼠体内后，与对照组相比肿瘤细胞的生长受到了明显的抑制(0.14±0.02g vs 0.21±0.04g vs 0.31±0.05g, p<0.05)。我们的结果提示Apoptin修饰的间质干细胞具有抑制肿瘤细胞生长的潜力和一定的应用前景。