NLRP3炎性小体对血管性痴呆的影响及补肾通络中药的干预研究

More and more attention were paid to inflammatory mechanisms on the pathogenesis of vascular dementia, and as the core of inflammation, NLRP3 inflammsome may provide new targets for its therapy. Kidney-Tonifying and Meridian-Dredging method can inhibit expression of inflammatory cytokines, and improve the learning and memory ability in patients and model rats effectively. Based on previous studies, this project will focus on the role of NLRP3 inflammsome in the pathogenesis of vascular dementia. With small interfering RNA technology, carry out experiments about hippocampal lentivirus palsmid stereotactic injection and cell transfection, test the index as NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB、eNOS、NADPH, etal, using qPCR, western blot, immunohistochemical method, and explore the possible NLRP3 activation and signal transduction pathways. Through animal experiments and medicated serum in vitro cell culture, together with decomposed recipes, discuss the effects of Yizhi Tongmai granual on vascular dementia and on NLRP3 expression from the macro and micro. This topic leads the research work about the relationship between NLRP3 inflammsome and the pathogenesis of vascular dementia, and firstly intervenes by Kidney-Tonifying and Meridian-Dredging medicine，will elaborate new ideas, new targets for the treatment of vascular dementia.

炎性机制在血管性痴呆发病中的地位日益受到重视，NLRP3炎性小体作为炎症反应的核心，可能为其治疗提供新的靶点。补肾通络法可抑制炎症因子表达，有效改善患者及模型大鼠的学习记忆能力。本项目将在已有研究的基础上，采用RNA小干扰技术，通过慢病毒质粒海马立体定位注射和细胞转染实验，研究NLRP3在血管性痴呆发病过程中的作用，并应用PCR、western blot、免疫组化等方法，检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、NF-κB、eNOS、NADPH等指标，探讨NLRP3的激活及信号转导通路。通过动物实验及含药血清体外细胞培养，并进行方剂拆方研究，从宏观和微观上探讨益智通脉颗粒对血管性痴呆的作用及对NLRP3表达的影响。本研究率先研究NLRP3炎性小体与血管性痴呆发病的关系，并通过补肾通络中药进行干预，阐述血管性痴呆治疗的新思路、新靶点。

炎性机制在血管性痴呆（VaD）发病中的地位日益受到重视，NLRP3炎性小体作为炎症反应的核心，可能为其治疗提供新的靶点。前期研究证实，益智通脉颗粒可有效改善VaD患者及模型大鼠的学习记忆功能。本项目采用RNA小干扰技术，通过体内外实验，探究NLRP3炎性小体在VaD发病中的作用及益智通脉颗粒及其拆方的干预机制。课题组在四年的研究过程中到达预期目标，完成以下工作：①成功构建靶向NLRP3的小干扰RNA慢病毒载体；②体外培养大鼠海马神经元实验结果表明，缺氧缺糖（OGD）可上调NLRP3、ASC、caspase-1、NF-κB的表达，促进IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌，促进大鼠海马神经元凋亡；靶向沉默NLRP3基因可降低caspase-1的表达、减少炎性因子的释放，在一定程度上减轻海马神经元的损害；益智通脉颗粒及其拆方通络方的含药血清干预可下调OGD海马神经元中NLRP3、caspase-1、NF-κB的表达，减少IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌，发挥神经元保护作用；③通过体内实验，证实双血管阻断致慢性脑缺血可激活NF-κB 、NLRP3及caspase-1，促进IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α等炎性因子的分泌，致大鼠海马区神经元萎缩及大鼠的学习、记忆功能降低；靶向沉默NLRP3基因及益智通脉颗粒可抑制此过程而达到保护大鼠认知功能的作用。研究结果证实：①脑缺血可通过激活NF-κB、NLRP3炎性小体及其下游caspase-1通路，促进炎性因子的分泌导致大鼠海马区神经元损害，从而导致其学习、记忆功能的降低；②益智通脉颗粒及其拆方通络方可通过降低NLRP3及其下游炎性通路的激活、减少炎性因子的释放，从而达到脑保护作用。本研究揭示了NLRP3相关通路是脑缺血致VaD的中间环节，益智通脉颗粒及其拆方可能通过调节此过程而达到脑保护作用，为进一步研究奠定了基础。