基于融合串联抗原表位的新型疫苗治疗热带无爪螨过敏症及其作用机理研究

Blomia tropicalis is a dominant dust mite and an important source of allergens in tropical regions. Blomia tropicalis can cause severe allergic reactions for people and their pets such as dogs and cats. Hainan Island is the most suitable habitat for Blomia tropicalis because of its special geography location and unique climate. Currently, there is a lack of effective and safe detection markers and vaccines for allergic diseases induced by Blomia tropicalis. We have successfully established the allergic mice model induced by Blomia tropicalis allegens. In this study, we collect sera of allergic patients, analyse the antigenic epitopes of the Blomia tropicalis major allergen Blo t 5 and Blo t 21 and design recombinant fusion allergens and fusion antigen epitopes. Then, a new biomarker for the detection of allergic reaction caused by Blomia tropicalis is developed to replace the crude extract of total allergens from Blomia tropicali. Secondly, the VLP vaccine is designed by co-expressing of hepatitis B core antigen (HBcAg) and fusion antigen epitopes, which can spontaneously form virus like particles (VLP) to display tandem antigen epitopes. We further investigate the therapeutic effect and mechanism of the VLP vaccine for treatment of allergy induced by Blomia tropicalis. This study lays the foundation for the development of a new vaccine for prevention and treatment of allergy induced by Blomia tropicalis and is expected to develop a new biomarker with broad application prospects for detecting Blomia tropicalis allergic reaction.

热带无爪螨，是热带地区的优势螨种和过敏原的重要来源之一，能够诱发人和犬猫等宠物产生严重过敏反应。海南岛由于其特殊的地理位置和独一无二的气候条件，是我国最适宜的热带螨孳生地。目前，对于热带螨诱发的过敏性疾病缺乏有效安全的检测标志物和防治型疫苗。我们前期研究成功建立了热带螨过敏小鼠模型。本课题通过收集临床过敏患者血清，分析热带螨主要变应原Blo t 5与Blo t 21的抗原表位，将两种变应原的抗原表位串联，设计重组融合变应原和融合抗原表位，开发检测热带螨过敏反应的新生物标志物，替代热带螨总变应原粗提物。其次，设计乙肝核心抗原HBcAg与串联抗原表位融合表达，形成展示串联抗原表位的病毒样颗粒疫苗。进一步地，研究病毒样颗粒表位疫苗对热带螨过敏小鼠的治疗效果，及其作用机理。本课题有望开发检测热带螨过敏反应的新生物标志物，具有广泛应用前景，同时为开发防治热带螨过敏症的新型疫苗奠定基础。

热带无爪螨，是热带地区的优势螨种和过敏原的重要来源之一，能够诱发人和犬猫等宠物产生严重过敏反应。海南岛由于其特殊的地理位置和独一无二的气候条件，是我国最适宜的热带螨孳生地。目前，对于热带螨诱发的过敏性疾病缺乏有效安全的检测标志物和防治型疫苗。在本项目中，我们原核表达了热带螨主要变应原，并建立了热带螨过敏小鼠模型。设计了乙肝核心抗原（HBcAg）与热带螨主要变应原融合蛋白HBcAg-rBlo t 5-21，透射电镜检测发现其可以形成病毒样颗粒结构。研究表明，HBcAg-rBlo t 5-21可以有效缓解过敏小鼠的症状。我们将筛选得到的三个表位串联，设计了三种核酸表位疫苗。三种核酸表位疫苗均可以有效抑制热带螨过敏小鼠的过敏症状，其中核酸表位疫苗PVAX1-HBcAg-PADRE-Blo t 5-21EP-CpG的效果最佳，进一步研究核酸表位疫苗的作用机理。研究发现，核酸表位疫苗免疫后使小鼠体内Th1/Th2平衡偏向Th1型反应，Treg/Th17平衡偏向Treg，诱导产生更高比例的CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T 细胞，发挥免疫抑制功能，从而抑制了小鼠过敏症状。此外，我们利用融合蛋白rBlo t 5-21、HBcAg-rBlo t 5-21和热带螨变应原粗提物作为包被抗原，检测人血清IgE。发现融合蛋白rBlo t 5-21、HBcAg-rBlo t 5-21均可以检测出阳性病例，其中融合蛋白rBlo t 5-21效果更佳。本项目为开发热带螨过敏症的防治疫苗奠定了基础，融合蛋白rBlo t 5-21有希望开发成为检测热带螨过敏反应的生物标志物，具有广泛应用前景。