高抗冻性灌木绵毛优若藜的抗冻蛋白基因的新途径克隆

以冷诱导前、后的高抗冻性常绿灌木- - 绵毛优若藜的叶片为材料，通过抑制消减杂交（SSH）方法，将表达的抗冻基因富集在几百个克隆中，根据测序结果，将推导的氨基酸序列中具有串联重复单元的克隆进行全长cDNA分离，然后通过原核表达及植物转基因方法，对表达产物进行抗冻活性检测，最终确定绵毛优若藜的抗冻基因的全长cDNA。该途径利用了我们发现的抗冻蛋白的一个特殊的共同特征- - 抗冻蛋白氨基酸序列都具有一个串联重复单元，解决了来源不同的抗冻蛋白之间由于无同源性而无法进行同源克隆的难题；与传统的克隆植物抗冻蛋白基因方法相比，具有目的性强、技术难度降低、实验时间缩短、可行性高等优点。通过该方案不但可以快速获得可供植物抗寒基因工程利用且具有自主知识产权的绵毛优若藜的抗冻基因，还可同时对其抗冻活性及特性进行检测与分析。该方案亦适合其它植物抗冻基因的快速克隆，具有重要的理论价值，最终可产生较大的经济价值。