dFMGEN抗AS作用及比较蛋白质组学研究

7-二氟甲基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(dFMGEN)是申请者设计和合成的一种保护氧化应激内皮损伤作用较金雀异黄素(GEN)更强的活性新化学实体(专利申请号：200710104389.4 公开号：CN 101225081A)。本项目拟与GEN比较研究dFMGEN对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导人主动脉内皮细胞(HAEC)损伤的保护作用，采用新西兰兔和ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)模型治疗实验评价其在体抗AS的有效性，测定其药动学参数和特性，用信号传导抗体芯片探索其对LPC处理的HAEC的蛋白质组学变化规律。用免疫组化、免疫沉淀和免疫印迹验证其对信号传导枢纽蛋白的作用及作用方式。所获研究结果对了解dFMGEN对LPC诱导损伤HAEC的应激、生存和凋亡信号网络的调控作用具有重要科学意义。能为研制AS性心脏病防治新候选药提供实验和理论依据，并为发现AS防治药物作用新靶标提供线索。

7－二氟甲氧基－5,4’－二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethyl-5,4’-dimethoxygenistein, DFMG)是自主设计和合成的具有血管内皮细胞氧化应激损伤保护作用的抗动脉粥样硬化(AS)候选药物。本项目在兔和载脂蛋白基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型证实：DFMG具有体内抗AS作用。其表现为降低血清中总胆固醇（TC）水平、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平、血清中载脂蛋白B（APO-B）水平、提高血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平；降低动脉粥样硬化模型的胸主动脉内膜-中膜厚度比值、缩小腹主动脉粥样硬化斑块面积、增加斑块内平滑肌细胞数目和斑块内胶原纤维含量。本项目在LPC诱导人主动脉内皮HAEC细胞损伤模型证明：DFMG具有保护LPC诱导血管内皮细胞氧化应激损伤作用。其证据是其能以剂量依赖方式发挥抗HAEC细胞损伤、拮抗细胞凋亡、抗细胞氧化和细胞粘附、抑制HAEC细胞黏附分子和炎症因子分泌等。本项目应用信号转导抗体芯片检测发现DFMG对LPC诱导氧化应激人HAEC细胞肿瘤坏死因子受体-2和树突状细胞分化抗原CD1a磷酸化具有调控作用。Western blot分析证实：LPC能够有效诱导人主动脉内皮细胞TLR-4蛋白表达，DFMG具有拮抗LPC诱导人主动脉内皮细胞TLR-4蛋白表达作用。同时，LPC可诱导人主动脉内皮细胞CD40/CD40L蛋白表达，DFMG具有明显的阻断效应。与genistein比较，DFMG灌胃给予大鼠，高效相色谱法测定其血浆峰值药物浓度更高、达峰时间更短。总之，DFMG是一种具全新作用机制和优良药动学特性的AS心脑疾病防治候选活性化合物。