减毒Stx1A-抗G250免疫毒素的构建、筛选及其抗肾癌作用与机制的实验研究

肾癌是最常见的肾脏恶性肿瘤，对常规放疗、化疗及免疫治疗均不敏感。近年来，免疫毒素对肿瘤的靶向治疗已成为免疫学研究的热点。志贺样毒素Ⅰ（Stx1）作为一种毒性极强的生物毒素，目前已被列为肿瘤治疗的候选物。但其毒性大、靶向性不强，难以临床应用。本课题拟利用基因定点突变技术,构建和筛选出减毒、高效的Stx1A基因表达序列；通过基因工程学方法将其与肾癌的高度特异性G250抗体基因进行连接，构建和表达重组减毒Stx1A-抗G250免疫毒素；将重组免疫毒素作用于体外培养的肾癌细胞和荷瘤裸鼠模型，观察其对肾癌的生长抑制作用；利用RT-PCR、Western-blot及免疫组织化学方法检测相关基因表达变化情况，分析重组免疫毒素抗肾癌生长的作用机制，为临床治疗晚期肾癌提供有效的新途径。

本课题成功构建减毒突变质粒，并构建原核表达载体，在原核表达菌株中表达出重组毒素蛋白，为研究靶向杀伤肾癌细胞奠定了实验基础。另外，通过细胞转染技术，将构建好的stx1A真核表达载体，转染肾癌细胞，测定其对细胞的增殖和凋亡影响，研究其对肿瘤细胞的杀伤作用。成功构建G250单抗，并验证其有效性。最后将tx1A和G250单抗连接成靶向毒素蛋白，但目前结果尚不满意，需进一步实验。