大疱性类天疱疮疱液外泌体介导CD4+T细胞免疫反应及其机制研究

Bullous pemphigoid (BP) is the most common autoimmune blistering disease，characterized by subepidermal blisters formation, inflammatory cells infiltration, autoantibodies and complement bind the basement membrane zone of the skin. Exosomes are small (-100 nm) membrane-bound extracellular vesicles released by various types of cells into biological fluids. Exosomes have a number of biological functions, such as intracellular communication, signal transduction, transport of genetic materials and modulation of immune response. At present, it has been proved that exosomes can trigger and maintain the immune response in the autoimmune disease, but the specific mechanism is not clear. We extract the blister fluid-derived exosomes from patients of BP, and the exosomes were identified by electron microscopy and Western Blot. We found that blister fluid-derived exosomes can promote mononuclear cells from peripheral blood of patients with BP to produce autoantibodies, and inducing the proliferation of CD4+ T cells. In this study, we will extract exosomes from blister fluid of patients from BP, separate and identify the characteristics of its proteins through cellular and molecular level, observe the function of blister fluid-derived exosomes on modulating CD4+ T cells and regulation of antibody production. This will help us clarify the effect of blister fluid-derived exosomes on regulating immune responses and represent its significance in the pathogenesis of bullous pemphigoud, providing a theoretical basis for future treatment strategy.

大疱性类天疱疮（bullous pemphigoid, BP）是常见的自身免疫性水疱病，表现为表皮下水疱生成，炎细胞浸润和基底膜带自身抗体和补体的沉积。外泌体是纳米级囊泡样小体，有多种生物学功能包括细胞间信息交流，基因物质的转运，调节免疫反应等。有研究证明自身免疫疾病中的外泌体能够触发和维持免疫炎症反应过程，但具体机制尚不清楚。我们前期研究提取BP患者疱液外泌体，在体外实验中证明其可以可以促进CD4+T细胞的增殖，并诱导自身抗体产生，提示疱液外泌体对BP具有免疫调节作用。本课题以BP患者疱液外泌体为研究对象，分离并鉴定其内容物成分；深入研究外泌体对CD4+T细胞免疫应答的影响；揭示外泌体关键蛋白分子及其影响CD4+T细胞免疫的分子机制，阐明疱液外泌体在BP疾病发生发展中的重要作用。

大疱性类天疱疮（Bullous pemphigoid, BP）是常见的自身免疫性水疱病，表现为表皮下水疱生成，炎细胞浸润和基底膜带自身抗体和补体的沉积。疱液内容物与皮损局部的免疫炎症反应密切相关，并且疱液可以进入机体循环系统，进而影响BP患者全身的免疫炎症反应。然而，疱液中各类炎症因子产生的来源，以及疱液如何参与免疫炎症反应的机制仍不清楚。外泌体是纳米级囊泡样小体，有多种生物学功能包括细胞间信息交流，基因物质的转运，调节免疫反应等。有研究证明自身免疫疾病中的外泌体能够触发和维持免疫炎症反应过程，但具体机制尚不清楚。本研究中我们主要探索BP患者疱液外泌体参与BP自身免疫紊乱及炎症反应的作用和机制。首先，我们用超高速离心法提取BP患者疱液外泌体，并用电镜、免疫印迹等对其鉴定。质谱分析提示BP疱液外泌体主要包含固有免疫反应，骨架蛋白合成、炎症反应、白细胞聚集、补体激活等相关蛋白。根据质谱分析追溯BP疱液外泌体的来源，得出疱液外泌体主要来源于皮损局部的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等免疫细胞。通过体外实验发现BP患者的疱液外泌体可以促进CD4+T细胞的增殖，且可以促进CD4+T细胞向Th17细胞分化，提示疱液外泌体对疱液外泌体在BP发病过程种具有免疫调节作用。另外，我们发现疱液外泌体可以被角质形成细胞摄取，通过活化STAT3和ERK信号通路，促进角质形成细胞释放IL-6、TNF-α、IL-8等炎症因子，且疱液外泌体可以促进中性粒细胞趋化至皮损。通过本项目的研究确证了BP患者疱液来源的外泌体可以活化自身反应性CD4+T细胞及角质形成细胞，具有促进炎症、调节免疫反应的作用，是参与BP病理过程的重要因素。