Dicer和Drosha基因遗传变异与膀胱癌易感性及其机制的研究

微小RNA（microRNA, miRNA）是一类新的非编码内源性小RNA，可通过抑制蛋白质翻译、剪切mRNA等方式调节靶基因表达。MiRNA生成通路中关键基因Dicer和Drosha基因如发生遗传变异将可能影响miRNA的形成，扰乱miRNA对靶基因的调控，影响基因的功能，最终导致肿瘤的发生和发展。本研究运用分子流行病学病例-对照研究方法，分析Dicer和Drosha基因遗传变异与膀胱癌易感性之间的关联性，并通过一系列分子生物学试验（如报告基因转染、EMSA和CHIP等）深入探讨其参与基因调控的分子机制，进一步揭示Dicer和Drosha基因参与膀胱癌发生发展的可能生物学机制，进而为今后膀胱癌的个体化治疗和预防提供重要理论依据。

Dicer和Drosha基因是miRNA生成通路上至关重要的两种RNA酶。本研究目的是探讨Dicer和Drosha基因遗传变异与中国人群膀胱癌易感性之间的关系及其可能的生物学机制。运用分子流行病学病例-对照研究方法，探讨Dicer和Drosha基因遗传变异与膀胱癌易感性的关系。我们运用卡方检验来分析基因型在病例组和对照组之间的分布差异，进一步使用非参数多因子降维分析方法（MDR）分析潜在的位点-位点和基因-环境的关系。功能方面，采用质粒构建、报告基因实验、RT-PCR以及Western Blot的分子生物学技术来进一步探讨该基因遗传变异在肿瘤的发病上的可能分子机制。结果发现，携带Drosha 3’-UTR rs10719 TC和CC基因型者与携带TT基因型者相比能够显著增加膀胱癌的发病风险（调整的OR=1.24, 95%CI=1.01-1.54），但是经FDR（false discovery rate）校正后，该位点的P值为0.119。通过MDR分析，三因素包括吸烟、Drosha rs10719 T>C 和 rs642321 C>T的模型是预测膀胱癌发病风险的最佳模型。通过生物信息学预测发现hsa-miR-27a/b可以与Drosha 3’-UTR结合。双荧光报告基因实验表明：当rs10719T出现时，hsa-mir-27a/b与Drosha 3’-UTR结合能力明显增强。Western Blot结果进一步表明hsa-mir-27b可以负调控Drosha基因转录后翻译，从而抑制Drosha蛋白的表达。该研究从宏观人群流行病学研究和微观分子生物学研究证明Drosha 3’-UTR的rs10719T>C多态位点可以影响hsa-miR-27b对Drosha 3’-UTR的调控，为进一步揭示Drosha基因参与膀胱癌发生发展过程的可能生物学机制提供重要理论依据，并为今后膀胱癌的预防、干预和治疗提供重要参考。