基于调控SIRT1/NF-KB信号通路，探讨改良芪归益肾方剂延缓慢性肾脏病进展机制的实验研究

Our work had confirmed that the prescription of ‘qi gui yi shen decotion(QGYS)’ could protect the glomerular filtration membrane and decrease renal tubular epithelial cell transdifferentiation. QGYS base on the principle of " Strengthening spleen and nourishing kidney, promoting blood circulation and removing obstruction in channels " . With the deepening of the research, we speculate these phenomenon relate to the level of sirt1. We want to find the mechanism among the level of sirt1, the signaling pathway of NF-KB and renal function. With the advanced technology of pharmacology and pharmaceutical engineering, we would do a series of experiments in vivo and in vitro to observe the change of sirtuins and the reactions such as the metabolism of extracellular matrix, immune inflammatory reaction and the role of the cell cycle genes, etc. We would do more experiments to confirm the innate relation of these phenomenon. We will use some of the molecular biological methods including proteomics, Immunoprecipitation , western blotting, high-performance liquid chromatography-mass spectrometry and gene chip and so on, to clarify the mechanisms of delaying renal fibrosis and the material basis of Chinese herbs.

已有的工作证实 “健脾益肾，活血通络”为原则创立的 “芪归益肾方”具有保护肾小球滤过膜和减轻肾小管上皮细胞转分化的作用。随着研究的深入，课题组基于前期工作基础提出应用改良的中药方剂调控功能蛋白表达，干预相关细胞信号通路可以有效减轻肾脏纤维化从而治疗慢性肾脏病。 本研究拟通过“调控功能蛋白SIRT1表达，影响NF-KB相关信号通路，保护肾功能”的视角，借助具有自主知识产权的 “芪归益肾方”探讨改良中药方剂治疗慢性肾脏病的核心机制。研究借助典型的动物和细胞模型，探讨改良的中药方剂通过调控SIRT1蛋白表达进而影响基因调控、细胞外基质代谢和免疫相关的炎症反应等作用阐明中医药在慢性肾脏病领域的应用价值。研究采用蛋白组学、免疫沉淀、蛋白免疫印记、液质联用和基因芯片等技术手段阐明中药方剂延缓肾脏纤维化的物质基础和作用机制。

本研究主要是通过具有自主知识产权的 “芪归益肾方”探讨改良中药方剂治疗慢性肾脏病的核心机制。证实中药复方的作用核心机制是“调控功能蛋白表达，影响细胞信号相关信号通路，保护肾功能”。本研究按照研究计划和课题组实际情况开展以下几个方面的工作⑴进行中药方剂中的活性组分在实验动物体内的药物代谢动力学特点的实验研究，进行中药活性成份的提取、鉴定和分析。⑵进行细胞信号转导通路、细胞周期调节基因和核因子和对肾小管上皮细胞和足细胞影响的各项量化指标研究。⑶应用基因芯片技术和生物统计分析技术，借助体内外实验研究的实验方法，通过专业的生物统计学分析方法讨论细胞信号通路的表达关系及中药方剂干预作用之间的关系。首先应用中药制药工程学的方式和方法改良中药方剂和提取中药方剂中的化合物或者混合物开展体内外实验研究，寻找中药方剂对于慢性肾脏病保护作用的最佳方剂组合和最有效的化合物或成分集团并确定了Oleanolic acid的研究价值。通过对方剂以及方剂的活性成分进行有效的提取和制药工程学方面的处理后，经过体内外实验研究验证可以明显提高治疗的效果。通过对于临床患者的RCT研究进一步明确了方剂的临床价值。研究证实中药方剂通过细胞信号通路调控肾脏组织功能细胞及细胞外基质，保护肾脏正常结构、维持肾脏功能、减轻肾脏病变过程中组织细胞外基质、氧化应激反应和炎症细胞因子的水平。课题相关内容向国家专利局申报国家发明专利一项（一种延缓慢性肾脏病进展的中药复方组合物及其临床应用，专利号：201710114212.1）。获得省部级科技进步奖两项（排名第一）。出版本领域专业著作一部（主编，50万字），在期刊发表课题直接相关论文8篇，其中SCI论文1篇，中文核心期刊7篇。培养研究生10人，博士1名，硕士9名。研究论文先后两次在国际学术会议壁报展示。研究工作受邀在2019年和2020年江苏省中医肾脏病年会上进行主旨发言，获得一致好评。