家蚕β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶2对核型多角体病毒蛋白糖基化的影响

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶是一种主要的糖苷酶，在昆虫中参与了包括糖蛋白合成的许多生理过程。目前绝大多数病毒需要借助宿主的酶系来加工糖蛋白，故β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的活性变化必然会影响病毒糖蛋白的糖基化，从而影响病毒的性状。根据申请人前期的研究，推测家蚕抗BmNPV品系主要是因为β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶2活性过高，影响了病毒蛋白的糖基化，进而影响病毒的传染性。本项目拟通过分析家蚕β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶2的酶学功能，研究其活性对病毒及宿主蛋白糖基化的影响。同时分析对核型多角体病毒高度抗性和感性的家蚕中β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶2及其调控的差异，以期阐明抗核型多角体病毒家蚕的抗性机理。这些研究将对杆状病毒真核细胞表达系统、宿主与病毒互作、乃至于人类病毒病的防治等方面具有十分重要的意义。

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶是一种主要的糖苷酶，在昆虫中参与了包括糖蛋白合成的许多生理过程。目前绝大多数病毒需要借助宿主的酶系来加工糖蛋白，故β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的活性变化必然会影响病毒糖蛋白的糖基化，从而影响病毒的性状。. 为了确定家蚕抗感性品种（NB：对BmNPV高抗；306：对BmNPV高感；BC8：近等基因系 ）中BmGlcNAcase 2的不同，我们使用PCR、qPCR、western blotting等方法，比较了抗感性家蚕中BmGlcNAcase 2的编码区序列差异、中肠组织中转录水平的表达量差异、三种组织（中肠、血淋巴和脂肪体）中蛋白水平表达量的差异以及血淋巴中酶活性的差异。结果显示在对BmNPV高抗和高感的两个品种中BmGlcNAcase 2编码区序列没有明显差异；转录水平上抗性家蚕中肠中表达量更高；蛋白水平上，抗性家蚕中肠和血淋巴中表达量更高；酶活测定结果显示抗性家蚕中的酶活性显著高于易感性家蚕。结果表明，抗感性家蚕品种中BmGlcNAcase 2的特征存在明显差异，为进一步研究家蚕BmNPV抗性与BmGlcNAcase 2的关系提供依据。. 接下来的实验中我们使用RNAi和化学抑制剂在BmN细胞中抑制BmGlcNAcase2的酶活性，进行病毒感染，研究病毒感染力的变化。并利用二维电泳技术分析BmGlcNAcas 2酶活抑制后细胞的糖蛋白的糖基化变化、病毒糖蛋白的糖基化变化。结果显示，病毒的感染能力在酶活抑制后没有明显差异。. 本研究为进一步弄清楚蛋白质糖基化在病毒感染宿主过程中的作用有所帮助，并对利用杆状病毒表达外源糖基化的蛋白有参考意义。研究基本按原计划进行，共发表学术论文7篇，其中SCI收录5篇。