基于蛋白质组学对三黄泻心汤干预Hp克拉霉素耐药的作用机制研究

Helicobacter pylori ( Hp ) is a serious threat to human health is a gram-negative pathogens, with the widespread use of antibiotics, the resistance to Hp is more and more serious, has become the leading cause of treatment failure of Hp related diseases. Therefore, an effective way to find the intervention of Hp resistance has become a practical problem to be solved in clinic. Put forward the " heat resistance " as the key pathogenesis of Hp infection in a large number of clinical research foundation class group, also found that " Sanhuang Xiexin Decoction " has a significant effect on Hp, this project aims to continue with the traditional Chinese medicine " stroke " theory as the guide, combined with modern medicine to Hp resistance gene and protein synthesis of understanding based on establishing the gastropathy, Hp animal model, through the observation of Sanhuang Xiexin Decoction, clindamycin and combined medication of three kinds of intervention effect of eradication rate and drug resistance rate of Hp, provide the basis for clinical selection of effective intervention strategies, and research methods used in proteomics, from the point of view of bacterial drug resistance protein synthesis to reveal the ultimate role of protein Hp resistance mechanism and intervention targets, provide some new theoretical guidance for the clinical treatment of Hp related diseases.

幽门螺杆菌（Hp）是严重威胁人类健康的一种革兰氏阴性致病菌，随着抗生素的广泛使用， Hp的耐药现象日渐严重，已经成为导致Hp相关性疾病治疗失败的主要原因。因此，寻找干预Hp耐药的有效方法已经成为临床中亟待解决的实际问题。 在大量临床研究基础上课题组提出"湿热中阻"为Hp感染的病机关键，同时发现"三黄泻心汤"具有显著的抗Hp作用，本项目拟继续以中医"方证相应"理论为指导，结合现代医学对Hp耐药基因及蛋白合成的认识，在建立Hp相关性胃病动物模型的基础上，通过观察三黄泻心汤、克林霉素及联合用药三种干预措施对Hp根除率及耐药率的影响，为临床遴选有效的干预策略提供依据，并运用蛋白质组学的研究方法，从细菌耐药蛋白合成的角度深入揭示Hp耐药的产生机理及干预因素的最终作用蛋白靶点，为Hp 相关性疾病的临床治疗提供新的理论指导。

幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori，Hp）是一种寄居于人体的胃和十二指肠区的革兰氏阴性杆菌，它是慢性胃炎和胃溃疡等多种胃病的病原菌，严重威胁着人类的身体健康，近年来，随着抗生素的广泛使用，Hp的耐药现象日渐严重，成为导致其治疗失败的主要原因，而且Hp也是导致胃癌的主要元凶，被世界卫生组织认定为胃癌的一类致癌原，但目前Hp感染引起胃癌的分子机制并没有得到完全阐明。. 课题组在完成了Hp感染小鼠模型制备及Hp耐药菌株筛选的基础上，将克拉霉素、三黄泻心汤及联合用药作用于该模型小鼠及Hp耐药菌株，进行了耐药率的观察，结果发现，Hp对克拉霉素具有很强的耐药现象，通过给予三黄泻心汤干预可以明显减弱Hp对克拉霉素耐药的发生，这对指导临床中筛选降低Hp耐药的治疗方案具有重要参考价值。课题组进一步通过PCR检测Hp孔蛋白（HopA，HopB，HopC）以及外流泵蛋白（HefA）基因的表达，观察了三黄泻心汤干预Hp耐药的作用机制，结果表明，三黄泻心汤干预Hp耐药的机制可能与HefA表达下调有关，但与HopA、HopB及HopC的表达未见明显相关性，这对中药干预Hp相关性疾病，特别是现代医学根治失败的患者具有重要的参考价值。. 由于我国是Hp感染及胃癌在全球范围内的高发地区，课题组以两者的相互关系为切入点，研究了Hp对胃癌细胞细胞周期及增殖的影响，结果发现，Hp对胃癌细胞的增殖有明显的促进作用，进一步通过流式细胞仪检测细胞周期，免疫染色、PCR及Western blotting等方法检测Hp共同培养胃癌细胞增殖相关基因的表达，结果表明，H19在Hp共同培养胃癌细胞中呈现出高表达状态，而且可能通过增强H19表达促进了胃癌细胞的增殖，Let-7 miRNA是这种调节网络的下游因素，这就表明H19在胃癌靶向治疗方面具有潜在的应用价值。课题组进一步将三黄泻心汤作用于这一过程，结果发现，三黄泻心汤虽然不能直接抑制胃癌细胞的增殖，但却可以通过抑制Hp的增殖间接干预胃癌细胞的增殖过程，而且这可能通过影响LncRNA H19的表达发挥作用。这一研究发现丰富了中药治疗肿瘤的机制内涵，揭示了三黄泻心汤可以通过抑制Hp的增殖影响胃癌细胞的微生态环境起到干预肿瘤生长的作用，为临床从多角度认识Hp与胃癌的关系及治疗胃癌伴Hp感染的患者提供了新的理论指导。