针刺调控视网膜感光细胞凋亡机制及作用靶点研究

本课题基于传统针灸学在眼科临床上的丰富实践经验和显著疗效，结合针灸学现代研究进展，以前期明目中药对感光细胞凋亡机制和作用靶点研究为基础，以针刺可能的作用靶点位于视网膜及其感光细胞等为依据，针对光化学损伤诱发感光细胞凋亡的关键环节，即凋亡前信号转导通路，采用经典的绿荧光照射法复制大鼠视网膜光损伤模型作为研究对象，运用多焦ERG技术等检测技术评价针刺对模型动物视功能和病理形态学的作用和影响；另一方面运用生化分析和分子生物学技术探索针刺对感光细胞凋亡前信号转导活性因子视紫红质含量及神经递质、视网膜凋亡抑制基因（Bcl－2）等的调节作用和针刺调控作用，明确针刺在视网膜光损伤感光细胞凋亡的作用靶点，以期在此基础上探索针刺在调节视觉通路及视觉损伤修复的相关机理研究，探索建立一种视网膜感光细胞凋亡的针刺效应评价模式，为今后进一步防治视网膜光损伤提供一种有效治疗手段，并为以后开展眼科疾病相关针刺实验基础研

针灸治疗是难治性眼病临床推崇的一种常用治疗手段，目前尚未揭示针灸效应的确切机制，尤其缺乏对视觉神经传导一极神经元视网膜感光细胞影响的研究。课题在成功建立N-甲基-N-亚硝基脲（N-methyl-N-nitrosourea.MNU）诱导的大鼠视网膜感光细胞凋亡模型基础上，探索了针刺对模型大鼠多焦视网膜电图（ERG）、光感受器凋亡数量、SOD、NO含量及谷氨酸含量、促凋亡基因（p53）等的调节作用，研究发现针刺能一定程度抑制MNU诱导的感光细胞凋亡，促进感光细胞凋亡后视功能的恢复，减轻视网膜组织细胞损伤，其作用机理与抑制大鼠视网膜P53mRNA表达、提高视网膜SOD活性、降低谷氨酸与NO含量从而抑制感光细胞凋亡和氧化应激反应有关。通过分子免疫检测手段发现，P53、Cyt-C、Apaf-1、Caspase-9可能共同构成感光细胞凋亡前信号转导活性因子，通过自身蛋白表达高低来调控感光细胞凋亡进程，针刺通过干预细胞凋亡前转导活性因子P53蛋白表达下调，保护视网膜感光细胞凋亡。课题初步明确了针刺干预视网膜感光细胞凋亡的调控机制和关键靶点，建立了视网膜感光细胞凋亡的针刺效应评价方法，为中医药防治视网膜感光细胞凋亡类眼病研究奠定了实验基础，拓展了新的研究领域。