胰腺癌癌前病变PanIN中靶向调控DPC4基因的miR-483-3p分子的检测和临床病理分析

DPC4 (Deleted in pancreatic cancer locus-4) plays an important role in carcinogenesis of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC). Combined clinical and pathologic morphology with molecular technology, we will detect the level of miR-483-3p regulating DPC4 in PanIN, precursor of PDAC, and find the relationship with DPC4. First, expression of miR-483-3p will be detected in PanIN by LNA-ISH. Second, for the same tissues, the protein of DPC4 will be tested by immunohistochemistry, and also KRAS, HER/2-neu, P16, P53 as their significant changes in PDAC. Then, clinical and pathologic imformation will be searched in these cases. At last, we need follow-up these patients and attained the data. Our study will make sure whether and how the expression of miR-483-3p is disregulated in PanIN, and whether this change is related to DPC4 directly and affect the prognosis of patients, and whether exchange of malignance is caused by this change in patients of pancreatitis. We will try to conclude that miR-483-3p activate the formation of PDAC through targeting DPC4, and provide the theory foundation and practical evidence for the role of miRNA at the beginning of carcinogenesis.

DPC4是胰腺癌特异性基因，它的改变在胰腺癌致病机理中占有重要地位，本课题结合临床病理形态学和分子手段检测调控DPC4基因的miR-483-3p在胰腺癌早期病变PanIN中的改变及与DPC4的相互关系。首先在PanIN病变中LNA-ISH法检测miR-483-3p表达；其次对相应的组织免疫组化法检测DPC4蛋白的表达，同时也对胰腺癌中有重要改变的KRAS、HER/2-neu、P16、P53蛋白进行检测；然后获取病例的临床资料、病理资料；最后对病例进行跟踪随访。本研究将得出在PanIN中是否存在miR-483-3p的表达改变并如何改变，这种变化是否与DPC4等直接相关，是否影响肿瘤的生存预后，以及与胰腺炎后期发生癌变是否相关；最终将明确miR-483-3p分子在PanIN中能否通过对DPC4的调控来推进肿瘤的发生，为miRNA分子作用于肿瘤始动环节的机制研究提供必要的理论基础和实验证据。

第一部分: miR-483-3p分子和SMAD4蛋白在胰腺导管腺癌及胰腺上皮内瘤变中的表达及意义.目的：结合临床病理形态学和分子手段检测miR-483-3p分子和SMAD4蛋白在胰腺癌早期病变PanIN中的改变情况以及两者的相互关系。.材料方法：收集北京协和医院病理科2010年-2016年间有完整临床资料的胰腺癌石蜡标本78例，采用锁定核酸原位杂交法（LNA-ISH）对miR-483-3p分子、应用免疫组织化学染色对SMAD4蛋白进行检测，综合两者的表达情况和临床病理数据进行整理和统计学分析。.结果：（1）78例胰腺导管腺癌（PDAC）的临床病理特征：男性（41例）女性（37例）比例相当，65岁以上及以下分别占39.7%和60.3%，PDAC大部分组织学分级为中分化（占60.3%），53.8%的病例伴有淋巴结转移。（2）从PanIN1、PanIN2、PanIN3到PDAC，miR-483-3p分子表达量随着组织学级别的升高而逐渐升高。（3）在PanIN1、PanIN2和PanIN3中，SMAD4蛋白大部分呈阳性表达（分别为98.6%、96.9%和79.1%），而在PDAC中只有53.6%的阳性表达。随着组织学级别升高，SMAD4的表达丢失率也增大。（4）在PanIN和PDAC中，miR-483-3p分子的表达与SMAD4蛋白的表达呈现了显著的负相关性（相关系数：-0.793，p=0.006）。.结论：在胰腺癌癌前病变PanIN到肿瘤性病变PDAC过程中，存在miR-483-3p分子表达水平的升高和SMAD4蛋白的失表达，两者呈现明显的负相关，为miR-483-3p分子负向调控SMAD4蛋白表达进而促进PDAC始动环节的机制研究提供了理论基础和实验证据。..第二部分：6个小专题进行研究和讨论：.1. 乳腺细针穿刺细胞学诊断结果C3的认识和理解.2. 胰腺癌中K-RAS相关的非编码RNA的研究状况.3. 胰腺原发间叶来源肿瘤的形态学及临床病理特征分析.4. 高级别的胰腺实性假乳头瘤的预后以及临床特征研究.5. miR-483-3p在胰腺癌中提示预后差.6. 在胰腺导管腺癌中，RUNX1通过miR-93分子来促进肿瘤的侵袭