药对钩藤莱菔子组分配伍靶向保护高血压血管内皮细胞的动态研究

在前期研究的基础上，以中医药配伍理论为指导，以药对钩藤莱菔子抗高血压有效组分（钩藤总生物碱和介子碱硫氰酸盐）为研究因素，以不同周龄SHR和TNF-α诱导的血管内皮细胞株为研究对象，观察不同病程阶段高血压血管内皮细胞损伤的动态变化规律，寻找各病程阶段血管内皮细胞损伤的特征变化及相关调控机制，并从靶向保护高血压血管内皮细胞角度确定药对钩藤-莱菔子有效组分的保护效应、作用靶点、作用环节和干预机制，阐释药对钩藤-莱菔子有效组分-作用靶标分子间的相互作用规律及分子基础，揭示中药方剂作用机理的内涵及价值。同时，通过分析、比较钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐及组分药对的药理效应，辨析钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐在组分药对中的配伍规律和配伍机制，合理诠释中药组分配伍的科学内涵，为建立基于有效组分的中药药对的组方设计提供新方法。

以中医药配伍理论为指导，选择不同周龄SHR、L-NNA诱导的高血压大鼠模型和TNF-α诱导的血管内皮细胞株为研究对象，以药对钩藤莱菔子抗高血压有效组分（钩藤总生物碱和莱菔子水溶性生物碱）为干预因素，采用体内实验与体外实验相结合的方法，观察了不同病程阶段高血压血管内皮细胞损伤的动态变化规律、相关调控机制以及药对钩藤-莱菔子有效组分的靶向保护效应、作用靶点、作用环节和干预机制。研究结果㈠： 药对钩藤莱菔子抗高血压有效组分配伍组能降低SHR清醒状态尾动脉血压并呈时效关系，改善SHR血管内膜完整性，减轻血管壁内皮细胞的脱落状态，降低血液中循环内皮细胞数目，其机理与降低循环内皮细胞CD62P和CD54平均荧光强度、降低血管壁炎性损害有关，同时采用基因芯片技术寻找SHR胸主动脉损伤中相关基因变化，筛选了SHR与正常大鼠及组分配伍组大鼠的差异基因。研究结果㈡：药对钩藤莱菔子抗高血压有效组分配伍组能降低L-NNA腹腔注射诱导的高血压大鼠模型清醒状态尾动脉血压，改善高血压大鼠血管内膜完整性，减轻血管内皮细胞脱落状态，降低循环内皮细胞数目，降低血浆vWF、ET-1、ICAM-1、VCAM-1和P-S含量，其效用多呈时效关系。其机制与降低循环内皮细胞CD62P和CD54平均荧光强度，降低脾脏淋巴细胞分泌TNF-a平均荧光强度，从而降低血管壁炎性损害有关。同时采用基因芯片技术寻找L-NNA诱导的高血压大鼠胸主动脉损伤中相关基因变化，筛选了L-NNA诱导的高血压大鼠与正常大鼠及组分配伍组大鼠的差异基因，并采用实时荧光定量PCR和western blot法检测血栓形成通路相关基因的表达及组分配伍组的干预效应。研究结果㈢TNF-α（5μg/L）可在体外诱导血管内皮炎症模型，钩藤总生物碱与芥子碱硫氰酸盐配伍组可改善内皮细胞形态结构，其机制与降低ET-1、ICAM-1和VCAM-1分泌，提高细胞NO分泌，下调细胞ICAM-1、VCAM-1、ET-1、PAI-1、PAI 、PECAM-1、PCNA、PGF-β1和CoⅠ的mRNA表达，上调细胞PAR-1mRNA表达，下调细胞NF-κB、AP-1和CoⅠ的蛋白活性表达等作用有关。本研究阐释了药对钩藤-莱菔子有效组分间的相互作用规律及分子基础，为药物组分清晰、作用靶点明确、作用环节及作用机制清楚、药物组分间量效关系优化的抗高血压中药的研发提供技术支撑。