外源性CCDC67基因对乳头状甲状腺癌细胞恶性表型的逆转作用及其机制

Coiled-coil domain-containing 67 (CCDC67) gene, as a newly cloned tumor suppressor gene, its functional inactivation can induce malignant proliferation of cancer cells. However, the function and mechanism of CCDC67 gene in papillary thyroid carcinoma (PTC) is still indistinct. In this study, clinical PTC tissue specimens will be detected through DNA, RNA and protein levels to research the role of CCDC67 in PTC and its relationship with clinical pathological characteristics, which will prove that CCDC67 is a candidate tumor suppressor gene of PTC preliminary. Furthermore, exogenous gene introduction technique will be used to introduce CCDC67 genes to PTC cell lines both in vivo and vitro; Then its effection with the cell growth, apoptosis, clone formation and tumorigenicity in PTC cell lines will be explored; Moreover, we will investigate its relationship with invasion and metastasis-associated protein to elucidate the effect and mechanism of CCDC67 gene on PTC malignant phenotype, which may provide a new theoretical basis and thought for the gene diagnosis and therapy of PTC.

卷曲螺旋结构域67（CCDC67）基因是一新近克隆的抑癌基因，其功能失活可导致细胞恶性增殖。而在乳头状甲状腺癌（PTC）中，其具体功能和作用机制尚不清楚。本项目首先采用临床PTC组织标本，分别从DNA、RNA和蛋白水平，研究CCDC67基因在PTC中的作用及其与临床病理特征的关系，初步证实CCDC67基因是PTC的候选抑癌基因；进而通过导入外源性CCDC67基因，从体内和体外两个方面，对缺乏内源性CCDC67蛋白的PTC细胞株的细胞生长、凋亡、体外克隆形成及体内成瘤性进行研究，最后再深入探讨其与浸润、转移相关分子的关系，以阐明CCDC67基因对PTC恶性表型的影响及其机制，从而为PTC的基因诊断和基因治疗提供理论依据和新的思路。

近年来分化型甲状腺癌的发病率呈逐年上升趋势，已成为内分泌系统最常见的恶性肿瘤。多数分化型甲状腺癌的患者经手术治疗、碘放射治疗及促甲状腺素抑制治疗后预后较好。但仍有少部分患者术后出现复发，需要再次手术，或者放射性碘治疗及促甲状腺素抑制治疗无效。对于这部分患者，我们急需寻找新的治疗方法。本课题中，我们通过研究CCDC67基因，阐明该基因在甲状腺乳头状癌发生发展过程中的作用机制，寻找甲状腺癌早期诊断分子标志物及靶向治疗位点。我们在细胞水平对CCDC67基因在细胞株及组织中的表达情况进行了分析及初步定位，并将之与临床病理因素进行相关分析。随后通过上调CCDC67基因表达，研究其对分化型甲状腺癌细胞株增殖、侵袭、凋亡等恶性表型的影响。最后通过在裸鼠体内成瘤，进一步验证了该基因在体内环境下对甲状腺癌的抑制作用。我们的实验表明：(1) 甲状腺乳头状癌细胞及组织中CCDC67 mRNA及蛋白表达缺失，CCDC67基因的下调在PTC中恶性转化的过程中起着重要的作用；(2)通过慢病毒转染TPC-1，构建出过表达CCDC67的TPC-1细胞株，首次表明低表达的CCDC67基因与已知PTC抑癌基因BRAF突变正相关，并使得Bcl-2 mRNA表达降低，Bax mRNA表达升高，同时促进了TPC-1的增殖、凋亡、迁移等恶性生物学表型；(3) 通过慢病毒转染CCDC67基因的细胞株在裸鼠体内的成瘤，活体成像的结果表明过表达CCDC67的OE组瘤体在荧光表达量上低于转染了空载体的NC组瘤体，后期对瘤体的重量、体积及抑瘤率的测定，及整个荷瘤实验过程中对瘤体生长速度的测定发现，OE组瘤体的重量、体积、生长速度均受到抑制。CCDC67基因是PTC的一个新的抑癌基因，其缺失性表达对PTC患者早期诊断尤其是可疑癌患者提供分子生物学支持；在已手术的患者中，术后基因检测其缺失性表达往往提示不良的预后，从而为PTC患者提供更加个性化的随访调查。在基因水平为患者的早期诊断及预后提供新的思路。