Vanin-1在胰腺癌相关新发糖尿病中的作用及其作为胰腺癌特异分子标记物的可行性研究

据新发糖尿病与胰腺癌高度相关性的最新研究进展，我们09年起研究新发糖尿病与胰腺癌伴随糖尿病的基因表型差异，首次发现：Vanin-1高表达与胰腺癌伴随糖尿病高度相关，该结果2010年1月为AJG修回录用。本项目拟在该研究基础上，综合Vanin-1上下游相关分子通路研究进展，首次设想：通过观察不同生物学行为的野生型与基因改造型的胰腺癌细胞系在Vanin-1表达量差异的情况下对胰岛活力、功能等的影响，研究Vanin-1/cysteamine及Vanin-1/PPAR-γ通路对胰岛合成/释放胰岛素的影响；并进一步通过Ettan 2-D DIGE研究Vanin-1对胰腺癌细胞蛋白表达谱的影响及可能影响胰岛功能的其他机制；最后通过in vivo模型动态观察基因改造细胞株（Vanin-1+，Vanin-1-）对胰岛功能及糖代谢的影响，验证?Vanin-1作为胰腺癌相关胰岛功能障碍标记物的价值。

胰腺癌是恶性程度极高并且术后生存率极低的实体肿瘤，其发病隐匿的临床特点导致确诊时患者已多伴有远处转移并导致造成极差的预后，因此胰腺癌的早期诊断是目前研究的热点。.近年来发现新发糖尿病是胰腺癌的病程发展中的早期并发症，在胰腺癌相关新发糖尿病模型中筛查出诊断相关的分子标记物，使其作为胰腺癌早期的特异的诊断依据有极强的可行性。 .据新发糖尿病与胰腺癌高度相关性的最新研究进展，本课题组自2009 年起研究新发糖尿病与胰腺癌伴随糖尿病的基因表型差异，首次发现：Vanin-1 高表达与胰腺癌伴随糖尿病.高度相关。本项目拟在该研究基础上，综合Vanin-1上下游相关分子通路研究进展，首次设想：通过观察不同生物学行为的野生型与基因改造型的胰腺癌细胞系在Vanin-1 表达量差异的情况下对胰岛活力、功能等的影响，研究Vanin-1及Vanin-1/PPAR-γ通路对胰岛合成/释放胰岛素的影响，验证 Vanin-1 作为胰腺癌相关胰岛功能障碍标记物的价值。.首先我们建立稳定转染的Vanin-1+的胰腺癌细胞系，并将野生型和转染空载体的胰腺癌细胞系作为对照组。分别与小鼠β细胞株(β-TC)进行共培养后，测定胞体内及培养液中的胰岛素含量，并进行胰岛素释放试验；并利用MTT， WB，流式细胞仪检测胰岛细胞活力和凋亡蛋白的变化。随后，我们研究 Vanin-1及Vanin-1/PPAR-γ通路的机制。对收集的胰腺癌细胞株条件培养液，通过ELISA检测条件培养液处理后胰岛细胞的PPAR-γ活性的变化，通过WB检测PPAR-γ蛋白的表达。我们的实验结果发现，实验组的β细胞株(β-TC)细胞内和培养液中的胰岛素含量较对照组显著降低，并且明显抑制了各时间段的胰岛素释放。β细胞株细胞活力较对照组明显降低, WB检测出组胰岛凋亡蛋白PARP-1较对照组表达上调，Casepase-3的前体表达下降，凋亡抑制蛋白BCL-2较对照组表达下调。ELISA证实条件培养液处理的胰岛细胞的裂解液中PPAR-gamma活性较对照组明显下调。本课题研究进展首次证实了：1. 胰腺癌细胞系Vanin-1的表达量与胰岛功能抑制间存在正相关。2.胰腺癌细胞Vanin-1表达量的增加可抑制PPAR-γ的活性，从而抑制胰岛细胞的胰岛素合成/释放功能，并促进胰岛细胞的凋亡。这是国际上首次开展vnn-1与胰腺癌相关糖尿病研究，并为后续的临床