基于Wnt/β-catenin信号通路探讨豆根管食通对食管鳞癌VEGF和DVL3的协同抑制机制

Invasion and metastasis are the key factors in the development of Esophageal squamous carcinoma (ESCC), abnormal activation of Wnt/β-catenin signaling pathway is the key of tumor angiogenesis, invasion and metastasis. In our preliminary experiment, Dvl3 could suppress invasion and metastasis in ESCC through Wnt/β-catenin signaling pathway, and the correlation between expression of VEGF and Dvl3 was also found in ESCC. Therefore, we consider that the synergistic effect may exist in the treatment of ESCC about suppression of expression of Dvl3 and VEGF. Turbid phlegm and blood stasis is a principal pathogenesis of ESCC, our group found one traditional Chinese Herb, Dougen Guanshitong Oral Liquid, which have curative effect on removing Phlegm and Blood Stasis (HTQY). Clinical research found that the drug has obvious curative effect on ESCC, and the basic experiment confirmed that it could inhibit tumor through restraining the proliferation , promoting apoptosis and reducing the expression of VEGF and Dvl3 in ESCC. The technology of slow virus vector. construction and siRNA jamming were used in this research. The scientific hypothesis proposed by us is that VEGF and Dvl3 have the coordinate repression on ESCC based on Wnt/β-catenin pathway. It was verified through vitro and vivo experiment by Dougen Guanshitong Oral Liquid.

侵袭转移是食管鳞癌（ESCC）发展的重要因素，Wnt/β-catenin信号通路的异常激活是肿瘤血管生成、侵袭转移的关键环节。我们前期研究中发现Dvl3可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制食管鳞癌的侵袭转移，VEGF和Dvl3的表达在ESCC中存在相关性，因此我们推测，抑制VEGF和Dvl3在治疗ESCC中可能存在协同作用。针对ESCC的核心病机“痰瘀互结”，课题组研发了以化痰祛瘀为治则的院内制剂中药复方豆根管食通，临床研究发现该药对ESCC有确切疗效，同时基础实验证实其可通过抑制ESCC细胞的增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，并可同时下调VEGF和DVL3的表达。本课题运用构建慢病毒载体和siRNA干扰等技术，运用豆根管食通从体内、外两方面验证在ESCC中通过Wnt/β-catenin信号通路协同抑制VEGF与Dvl3进而发挥抗肿瘤作用的科学假说。

侵袭转移是食管鳞癌（ESCC）发展的重要因素，Wnt/β-catenin信号通路的异常激活是肿瘤血管生成、侵袭转移的关键环节。前期研究发现Dvl3可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制ESCC的侵袭转移，VEGF和Dvl3的表达在ESCC中存在相关性，抑制VEGF和Dvl3在治疗ESCC中可能存在协同作用。针对ESCC的核心病机“痰瘀互结”，课题组研发了院内制剂中药复方豆根管食通，对ESCC有确切临床疗效，基础实验证实其可通过抑制ESCC细胞的增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用，并可同时下调VEGF和DVL3的表达。.本课题围绕以下三方面开展研究①基于生信数据库的食管癌发生发展相关靶点筛选及中药复方豆根管食通干预食管鳞癌相关靶标的预测。应用网络药理学方法获取该药与EC相关活性成分59种，通过TCMSP数据库得出106个具有EC治疗作用的有效靶点；GO生物功能富集分析和KEGG通路富集分析显示，靶点主要富集在107个显著差异通路中，涉及1341个显著生物过程，59个显著差异分子功能，26个细胞定位显著差异位置。进一步表明豆根管食通通过调控多个靶点起到治疗EC作用。.②通过构建 VEGF 过表达及干扰稳定转染 ESCC 细胞系，研究ESCC的细胞 增殖能力、迁移和侵袭能力的表达变化。通过体内外实验证明VEGF过表达可增强ESCC细胞的迁移和侵袭能力，VEGF沉默明显抑制ESCC细胞中细胞增殖，VEGF过表达时Dvl3和β-catenin的表达水平明显升高，三者表达水平呈正相关。.③通过豆根管食通口服液对ESCC的体内外开展干预研究，检测豆根管食通对ESCC的抑制情况。结果显示：ESCC组织中β-catenin和DVL3的表达水平明显高于其对应物，并且ESCC组织中β-catenin和DVL3的表达水平分别与VEGF的表达呈正相关，提示豆根管食通在ESCC中通过VEGF抑制了DVL3表达进而控制了食管鳞癌的进展。.该研究从疾病发病机制入手，采用西医的基础研究机制探讨ESCC中医症候学，从体内、外两方面验证以化痰祛瘀法为治则的豆根管食在ESCC中通过Wnt/β-catenin信号通路协同抑制VEGF与Dvl3进而发挥抗肿瘤作用的科学假说。为中医药指导临床ESCC抗肿瘤治疗提供理论依据，为中医药治疗食管鳞癌提供新的思路和视角。