抗RCP抗体通过影响巨噬细胞吞噬功能参与系统性红斑狼疮发病的机制研究

Systemic lupus erythematosus(SLE) is an autoimmune diseases characterized by elevation of antibodies participating in the occurrence and progress of the disease. In our pilot studies, using high-throughput protein chip screening and enzyme-linked immunosorbent assay, we detected highly increased levels of anti-Rab conjugated protein (RCP) antibodies in SLE patients. As RCP is associated with the phagocytic process of macrophages, we hypothesize that increased anti-RCP antibodies impair the phagocytic function of macrophages, then change the micro-environment of organs and contribute to the development of SLE. In this project, we will conduct the following experiments: 1) Clinical investigation: to examine the correlation between anti-RCP antibody and disease activity in SLE patients and validate anti-RCP antibody as a biomarker. 2) In vitro studies: to determine the effect of anti-RCP antibody on phagocytic process and its related cytokines and signal pathways. 3) In vivo studies: to evaluate the influence of anti-RCP antibody administration on phagocytic function and disease progression of in C57BL/6, MRL/lpr lupus mice and RCP conditional knockout in macrophages(RCP-cKO). The expected findings will provide new insights in understanding the pathogenesis and new view on the diagnose and treatment of SLE .

系统性红斑狼疮（SLE）是一种以自身抗体增多并参与疾病发生与发展的自身免疫性疾病。我们前期通过高通量蛋白芯片筛选和酶联免疫吸附法验证，发现抗Rab偶联蛋白（RCP）抗体在SLE患者中异常高表达。基于RCP蛋白可影响巨噬细胞吞噬功能的认识，抗RCP抗体升高是否影响巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬清除，并改变靶器官的免疫微环境，从而参与SLE发病？因此，本课题计划从以下三方面研究：1）临床相关性：SLE患者中抗RCP抗体与疾病活动度相关性，评估其作为生物标志物及诊断价值。2）体外实验：抗RCP抗体使巨噬细胞吞噬功能下降；影响吞噬相关炎症因子及信号通路。3）体内实验：正常小鼠、狼疮小鼠及巨噬细胞RCP条件敲除小鼠注射抗RCP抗体，狼疮表型观察及对靶器官巨噬细胞吞噬功能影响。本研究有助于深入了解SLE发病机制，为临床诊治提供新思路。

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE)是一种可以累及机体多器官的自身免疫性疾病，被称为自身免疫性疾病的原型。免疫系统的异常表现为体内存在大量的循环自身抗原（细胞凋亡的增加和清除的异常），导致产生大量针对各种自身抗原的自身抗体并引起器官的免疫损伤。巨噬细胞作为清除凋亡细胞的主力军，其吞噬功能的下降，可能导致狼疮的发生。本研究原创性在SLE患者中发现针对巨噬细胞吞噬功能的抗RCP抗体升高，并进一步在体外和体内研究探讨其在SLE发病中的机制。.本课题从临床现象出发，首先通过高通量抗体芯片并通过酶联免疫吸附法验证，在SLE患者中抗RCP抗体升高，并且与SLE疾病活动度相关。并且相对于C57BL/6小鼠，MRL/lpr经典的狼疮小鼠模型中也发现抗RCP抗体升高。进一步在体外实验中，发现抗RCP抗体可以降低人外周血单核细胞来源的巨噬细胞，小鼠骨髓来源的巨噬细胞及小鼠RAW264.7巨噬细胞细胞系的吞噬功能。在体内，相对于Isotype组，给C57BL/6小鼠腹腔注射抗RCP抗体6月后可以导致其出现狼疮样表现，包括抗核抗体升高，抗dsDNA抗体升高及尿白蛋白比肌酐升高，其腹腔巨噬细胞的吞噬功能下降，并且血清TGF-β表达下降。通过本研究阐明了“抗RCP抗体升高--巨噬细胞吞噬功能下降--自身免疫反应增加--SLE发病”的病理机制，形成抗RCP抗体可以通过影响巨噬细胞吞噬功能，促进自身免疫反应从而参与SLE发病的新假说。.目前本研究已经构建具有生物活性的并且具有自主知识产权的抗RCP抗体；已经建立体外干预巨噬细胞吞噬功能的技术方法；已经在体内证实抗RCP抗体可以导致小鼠狼疮样表现。抗RCP抗体参与SLE发病是我们的原创性发现，有很强的创新性。本项目对于提高我国在该研究领域的学术地位、发展具有自主知识产权的特异性抗体研究，具有重要科学意义。