外源基因定点靶入人胚胎干细胞技术的建立

人胚胎干细胞（hESCs）由于具有无限增殖能力和多向分化潜能，因而在基础和应用研究中有巨大价值。对hESCs进行高效定点基因修饰是发挥其研究价值的重要前提。然而对hESCs进行基因打靶一直是一个技术难题。关于同源重组介导的定点基因修饰，至今学术界只有几个尝试性的报道，一直没有取得效率上的突破，这也是长期以来制约人胚胎干细胞研究的一个重要因素。我们在以往的基因治疗研究中，发现在对人核糖体RNA基因区进行基因打靶时，可以取得相当高的效率。我们对hESCs的这一位点进行了尝试性的基因打靶，结果获得的效率（同源重组率为5.1×10-6）比所有的相关文献报道都有数量级上的提升，所以我们希望能进行进一步的研究，建立一套完整高效的基因定点导入技术体系，将人核糖体基因区作为外源基因的一个通用的停泊位点，同时建立多个定点基因修饰的hESC株，用于后续更深入研究的工具细胞，为hESCs研究提供新的思路和手段。

人胚胎干细胞（hESCs）由于具有无限增殖能力和多向分化潜能，因而在基础和应用研究中有巨大价值。对hESCs进行高效定点基因修饰是发挥其研究价值的重要前提。然而对hESCs进行基因打靶一直是一个技术难题。本研究将人核糖体基因区作为研究的靶位点，建立了一套完整高效的基因定点导入技术体系，将人核糖体基因区作为外源基因的一个通用的停泊位点，为hESCs研究和基因治疗提供了新的思路和手段。同时我们构建了针对rDNA区的TALEN和TALENickase，进一步促进了rDNA区定点整合的效率。另一方面，随着人诱导多潜能干细胞（iPSCs）的发展和应用,我们将研究方向向单基因遗传病的原位修复进行了一定的延伸。相信以我们建立的技术优势，一定会在该领域取得优异的成果。目前该研究已发表SCI论文2篇，其余数据还在整理投稿当中。