CYP2J2基因转染和可溶性环氧化物水解酶抑制剂1471对肺动脉高压影响的研究

肺动脉高压(PAH)是一种以肺血管重构为主要病理特征的疾病，持续发展可导致右心衰竭而死亡。目前该病尚缺乏有效的治疗手段。大量研究提示，肺血管内皮功能紊乱和血管周围炎症是肺血管重构的关键因素。环氧化二十碳三烯酸（EETs）是花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢的产物，具有保护血管内皮功能、抑制血管平滑肌细胞迁移和抗炎及促血管生成作用。我们的初步试验结果显示，质粒载体介导的CYP2J2基因导入,不仅能够明显降低野百合碱诱导的大鼠PAH，而且减轻右室肥厚程度。本研究将分别采用重组腺相关病毒（rAAV）载体介导的CYP2J2基因转染和可溶性环氧化物水解酶抑制剂1471灌胃的方法，在野百合碱诱导的PAH大鼠模型中，深入研究CYP2J2基因和1471对PAH的长期干预效应，并在整体和细胞水平上探讨其可能的作用机制，为PAH的治疗提供全新思路。

肺动脉高压（PAH）的特点是血管阻塞和潜在的血管收缩，导致肺血管阻力增加和右心衰竭。PAH的病理改变，包括内皮细胞损伤和凋亡、中膜增厚、炎症细胞浸润和肺小动脉血栓形成。在血管重塑的早期阶段，炎性浸润直接参与了内皮细胞的凋亡。大量实验证据表明，内皮细胞凋亡诱导介质——特别是转化生长因子-β1（TGF-β1）释放，激活了血管平滑肌细胞的增殖和迁移。细胞色素P450表氧化酶2J2（CYP2J2）将花生四烯酸代谢为有生物活性的顺式-环氧化二十碳三烯酸（5,6-EET, 8,9-EET, 11,12-EET和14,15-EET）。EETs在心血管稳态中发挥了多种生物学功能。EETs的抗炎、抗迁移和促进生存效应提示EETs可能具有潜在的对抗肺血管重构的功能。本研究探讨了CYP2J2基因过表达对野百合碱（MCT）诱导的大鼠肺动脉高压的影响，并进一步探讨了EETs干预和CYP2J2过表达对TNF-α诱导的肺动脉内皮细胞（PAECs）凋亡和TGF-β1诱导的肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖与迁移的影响。我们的结果显示：MCT给药3周可以诱导显著的肺动脉高压，而CYP2J2基因治疗在不改变体循环动脉血压和心率的前提下，可以显著降低肺动脉高压的进展和肺血管重构的发生。这一效应可能与CYP2J2基因过表达增加了内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达和活性，并且抑制炎症和TGF-β/BMPRII-Smads通路有关。我们原代培养了猪肺动脉的PAECs和PASMCs。细胞活性检测和流式细胞术结果显示：EETs干预或者CYP2J2过表达显著抑制了TNF-α诱导的PAECs凋亡。这一重要的保护效应主要包括以下两个方面：首先，EETs干预或者CYP2J2过表达抑制了TNF-α诱导的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达的下调和促凋亡蛋白Bax表达的上调；其次，EETs干预或者CYP2J2过表达激活了磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶(ERK)信号通路。我们也发现，11,12-EET和14,15-EET显著地抑制了TGF-β1诱导的PASMCs的迁移，然而，体外实验中，EETs对TGF-β1诱导的PASMCs增殖没有显著影响。总之，这些数据表明，EETs干预或者CYP2J2基因治疗可能成为一种治疗肺动脉高压的新方法。