组织因子靶向性纳米粒介导siRNA抑制动脉粥样硬化血栓形成的实验研究

组织因子（TF）作为炎症与凝血机制之间相互作用的关键因子，与动脉粥样硬化的发生、发展和血栓形成密切相关。有研究表明可通过抑制TF表达来减少动脉粥样硬化相关心血管事件的发生，然而如何实现对粥样斑块部位的定向干预仍然是研究难点。EGFP-EGF1是我们制备的一种可特异性靶向TF的融合蛋白，前期实验证实EGFP-EGF1修饰的PEG-PLA纳米粒（EGFP-EGF1-PEG-PLA-NP）能靶向定位于高表达TF的细胞及血栓部位，是以TF为靶点药物的良好载体；同时我们在小鼠动脉粥样斑块部位检测到TF高表达，并已筛选出可抑制TF表达的siRNA。因此，本研究拟构建载TFsiRNA表达载体的EGFP-EGF1-PEG-PLA-NP，通过细胞及动物模型对其靶向性、安全性、药动学进行检测，进而探讨其对TF高表达的动脉粥样斑块及血栓形成的影响，为动脉粥样硬化血栓形成的靶向治疗提供新途径。

3年来，课题组紧密围绕组织因子与动脉粥样硬化的发生、发展和血栓形成的相关性，开展粥样斑块及血栓的定向干预研究，取得了一定成绩。首次成功制备了TF-siRNA pGenesil-3载体，将其装载于EGFP -EGF1蛋白修饰纳米粒中（EGFP-EGF1-PEG- PLA- NP），鉴定并优化了该纳米粒的粒径、电位、包封率、载药量及体外释放率；在体外研究了EGFP-EGF1-PEG- PLA- NP细胞毒性、细胞结合与摄取能力，以及对细胞膜TF表达的影响，证实该系统能主动靶向脑微血管内皮细胞膜上的TF，并定向抑制其表达；进而通过动物体内外实验，研究了载siRNAEGFP-EGF1-PEG-PLA-NP对细胞与粥样斑块部位TF表达、斑块及血栓形成的影响。该工作较为系统地研究了EGFP-EGF1–PEG–PLA–NP的载药系统，载药后对以组织因子为靶点的局部靶向和干预有效可行，证实可通过抑制TF表达来减少动脉粥样硬化相关脑血管事件的发生。此项研究为抗栓研究提供了新思路，在生物医学纳米材料领域做出了新的探索，并初具转化研究前景。研究成果已获得国家发明专利1项（ZL 201010106567.9），在Biomaterials、PLoS One、Int J Nanomedicine等优秀杂志上发表系列研究论文5篇，总影响因子达到28.6分，共被引用42次，受邀进行国内外大会报告3次，已基本完成了预定研究目标，在小动物水平实现对高表达组织因子血栓部位的纳米载药靶向干预。