miR-452在原发性肝细胞癌侵袭、转移及复发中的作用及机制研究

影响原发性肝细胞癌（HCC）预后的主要因素为肿瘤的复发及转移，但是其机制和分子特征尚未清楚，缺乏早期诊断和预后评价指标。研究发现miRNA在HCC的复发及转移方面发挥着重要作用。在前期工作中，我们利用miRNA芯片技术及最新的第二代测序技术通过比较HCC肿瘤组织、瘤旁组织及正常肝组织中miRNA的差异表达，均发现miR-452在HCC肿瘤组织中的表达明显增高，并且其表达水平和患者的预后呈显著相关性。后期工作我们拟利用生物信息学研究miRNA靶基因网络策略，肿瘤增殖、侵袭、转移等相关功能实验技术及血清miRNA检测的诊断技术等实验平台，对miR-452调节的HCC侵袭转移性进行系统、深入的研究，以明确miR-452在HCC侵袭转移中所发挥的生物学功能及相关信号传导通路，同时结合临床，探讨miR-452在HCC诊治与术后复发、转移评估等方面的意义及价值。

本研究中，我们利用miRNA 表达谱芯片技术，比较分析了正常肝组织、肝炎肝组织、肝硬化肝组织及不同分期肝癌组织中的miRNA分子表达差异情况，发现HCC组织中miR-422a表达显著降低，并且其表达水平和HCC的临床分期、临床进展、复发及转移情况密切相关。功能试验中，在肝癌细胞系中过表达miR-422a的表达水平之后，我们发现，与对照相比，HCC细胞系的增值及转移能力明显降低。在裸鼠皮下成瘤模型中也发现，过表达miR-422a之后，与对照相比，HCC细胞系的体内成瘤能力明显降低，在裸鼠肝脏原位荷瘤模型中也观察到了同样的现象，过表达miR-422a之后，裸鼠肝脏成瘤的数目、体积及重量均明显降低。随后我们通过生物信息学的方法寻找并验证了forkhead box G1 (FOXG1)， FOXQ1，FOXE1是miR-422a下游的靶基因，miR-422a通过forkhead box G1 (FOXG1)，FOXQ1， FOXE1发挥其生物学功能。体内外实验证明，抑制FOXG1， FOXQ1，FOXE1的表达可以抑制HCC细胞系的增值及转移能力。此外，我们还发现miR-422a的启动子区受其三个靶基因负调控，其和下游的靶基因形成了一个双向环状负调控循环。我们还进一步研究了miR-422a成为HCC治疗靶点的可能，我们在裸鼠成瘤模型及DEN诱癌模型中均观察到与对照相比，过表达miR-422a之后，裸鼠成瘤能力被显著抑制，表明miR-422a可以作为一个治疗HCC的潜在靶点。