中国健康女性阴道微生态系统中乳杆菌菌种多样性研究

乳杆菌是阴道微环境中的优势菌。阴道感染疾病的发生与该环境中乳杆菌数量减少或菌种异常关系密切。以往研究表明：不同国家健康女性阴道乳杆菌菌种存在差异。目前国内阴道乳杆菌研究缺乏系统性和准确性。本课题将以研究中国健康女性阴道分泌物中细菌16s rRNA基因为基础，用克隆文库、种特异性PCR、t-RFLP、DGGE四种方法研究中国健康女性阴道微环境中的乳杆菌菌种构成；通过q-PCR对健康人群阴道中的乳杆菌菌种进行定量分析。希望通过上述研究了解中国健康女性阴道乳杆菌菌种谱及构成比，建立中国女性阴道乳杆菌各菌种16s rRNA基因库；同时评价克隆文库、种特异性PCR、t-RFLP和DGGE在阴道乳杆菌菌种相关研究中的差异、探讨各自的临床应用前景。该研究是阴道感染性疾病中乳杆菌变化的研究基础；将为阴道感染性疾病的微生态学个体化诊断、指导治疗和疗效监测提供依据；为开发适合中国人阴道微生态调节剂提供重要信息

乳杆菌是阴道微环境中的优势菌,与阴道感染疾病的发生密切相关。中国健康女性阴道乳杆菌构成规律的研究缺乏系统性和准确性。本课题通过克隆文库技术、种特异性PCR、t-RFLP、DGGE以及real-time PCR五种方法对中国健康女性阴道中乳杆菌的菌种构成特点进行了探索，结果发现：育龄期组共发现了阴道乳杆菌的13个菌种，绝经后组发现了阴道乳杆菌的10个菌种。育龄期女性阴道乳杆菌多样性较绝经后多。经期前后的女性，阴道乳杆菌菌种并无明显改变，而乳杆菌的含量有一定差别。吸烟和性生活与阴道乳杆菌的含量并无相关性，但与阴道乳杆菌菌种多样性存在相关性。阴道冲洗的女性，阴道乳杆菌的菌种多样性和乳杆菌含量均明显低于非阴道冲洗的女性。菌种构成规律在5个不同地区有着类似的特点。克隆文库、t-RFLP、DGGE均是探知样本中未知菌种的方法，克隆文库法和DGGE有较高的检测效率，且不受标准库的影响。种特异性PCR是研究阴道微环境中乳杆菌构成的基本方法，具有高检测效率和高特异性的优势，且不受标准库的影响，但该方法仅适用于对已知菌种进行研究。同时本研究通过克隆文库将39个乳杆菌菌株的16srDNA的全长序列存放于质粒DNA中进行保存。.本项目在完成上述研究的同时，分离、纯化和鉴定了一大批健康女性阴道来源的乳杆菌菌株（菌种），并对其中的部分菌株的生物学功能进行了研究。