胰岛新生相关蛋白（INGAP）表达上调剂筛选模型的建立与应用

糖尿病已成为继心脑血管疾病和肿瘤后第三位主要的非传染性疾病，功能性胰岛β细胞不足是糖尿病最基本的病理学特征，通过胰岛再生或新生来增加胰岛β细胞量成为预防和治愈糖尿病最重要的理念和策略。胰岛新生蛋白（INGAP）是在寻找具有胰岛新生活性的内源性分子的过程中发现的第一个治疗性候选物，在胰岛新生过程中起着非常重要的作用，成为糖尿病治疗的新靶标。为了寻找能够上调INGAP表达的化合物，本课题拟利用荧光素酶报告基因的方法，建立INGAP上调表达剂筛选模型，对筛选模型进行优化，以适用于高通量筛选，并对微生物次级代谢产物库和化合物库进行筛选，以期利用微生物天然产物库的多样性得到特异性上调INGAP表达的活性化合物。其对于探讨基于INGAP药物的分子作用机制、深刻理解胰岛新生、乃至探索开发新型糖尿病治疗药物都具有重要的科学意义和应用价值。

项目摘要.糖尿病已成为继心脑血管疾病和肿瘤后第三位主要的非传染性疾病，功能性胰岛β细胞不足是糖尿病最基本的病理学特征，通过胰岛再生或新生来增加胰岛β细胞量成为预防和治愈糖尿病最重要的理念和策略。胰岛新生蛋白（INGAP）是在寻找具有胰岛新生活性的内源性分子的过程中发现的第一个治疗性候选物，在胰岛新生过程中起着非常重要的作用，成为糖尿病治疗的新靶标。为了寻找能够上调INGAP表达的化合物，本课题拟利用荧光素酶报告基因的方法，建立INGAP上调表达剂筛选模型，对筛选模型进行优化，以适用于高通量筛选，并对微生物次级代谢产物库和化合物库进行筛选，以期利用微生物天然产物库的多样性得到特异性上调INGAP表达的活性化合物。其对于探讨基于INGAP药物的分子作用机制、深刻理解胰岛新生、乃至探索开发新型糖尿病治疗药物都具有重要的科学意义和应用价值。    .结题摘要.糖尿病是由于胰岛素分泌缺陷而产生高血糖症的疾病，胰岛β细胞过度凋亡、功能减退是糖尿病发病的重要环节。基础研究已发现了一些诱发胰岛新生的先导物，其中INGAP是在寻找具有胰岛新生活性的内源性分子过程中发现的第一个治疗性候选物，在胰岛新生过程中发挥着重要作用。已有实验证明，INGAP能够促进β细胞的增殖，促进内源性胰岛素分泌，改善血糖控制。因此，认为INGAP是一个潜在的安全有效的糖尿病治疗新靶点。.本课题以叙利亚金黄地鼠基因组DNA为模板扩增INGAP核心启动子序列，克隆至pGL4.17质粒载体构建重组质粒。采用脂质体介导的方法将重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染金黄地鼠胰岛β细胞HIT-T15，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达活性。对瞬时转染条件进行优化，以豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(PMA)作为阳性对照来评价模型的有效性，Z’因子为0.57，适用于进行高通量筛选。用该模型筛选本研究所化合物库，其中白藜芦醇显示出较好的上调作用，EC50为1.6μg/ml。已有研究表明，白藜芦醇能够促进葡萄糖摄取、提高肝糖耐受量和对胰岛素的敏感性，具有深入研究的价值。.该模型的成功建立与应用对于探讨基于INGAP药物的分子作用机制、深刻理解胰岛新生、乃至探索开发新型糖尿病治疗药物都具有重要的科学意义和应用价值。